 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2218 | 回復(fù): 12 | ||
sandydcy新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
求助大家Elisa實(shí)驗(yàn)問題~ 已有3人參與
|
|
我在進(jìn)行Elisa實(shí)驗(yàn)的初步摸索階段，以前從來沒有接觸過相關(guān)實(shí)驗(yàn)，也沒有很系統(tǒng)的學(xué)習(xí)過 希望各位大神們能幫幫忙！先謝過~~~ 前言：1.我使用的是雙抗夾心法，由于沒有兩個(gè)不同位點(diǎn)的單抗，故選擇的是一個(gè)單抗一個(gè)多抗； 2.同時(shí)沒有自己制作酶標(biāo)抗體，而是采用 抗體（兔源）-抗原-抗體（鼠源）-酶標(biāo)羊抗鼠 來檢測(cè)； 3.檢測(cè)過程中，先用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)純抗原來制作曲線，用Logistic曲線擬合2（四參數(shù)）算法擬合曲線，R方都在0.999以上，我認(rèn)識(shí)的一個(gè)之前做過抗體的人說結(jié)果很好（我不太懂）； 4.抗原為細(xì)菌中表達(dá)的蛋白，需要檢測(cè)的是轉(zhuǎn)到植物中表達(dá)的該抗原； 現(xiàn)遇到的問題如下： 1. 我用純抗原來做曲線是一個(gè)Logistic曲線擬合2（四參數(shù)）的曲線，不是直線，需要用ElisaCalc這個(gè)軟件來計(jì)算，這樣的結(jié)果對(duì)么？ 2. 用純抗原做好曲線后，檢測(cè)植物蛋白檢測(cè)不出來（已用商品化試劑盒測(cè)試確定提取物中含有轉(zhuǎn)入的蛋白）檢測(cè)抗原蛋白卻能檢測(cè)出來（平行操作）是為什么呢？正反包被都測(cè)試過（即包被多抗+抗原+單抗+抗單抗酶標(biāo)二抗；包被單抗+抗原+多抗+抗多抗酶標(biāo)二抗），抗原可以檢測(cè)出來，含抗原的植物提取物卻檢不出來；直接包被植物提取物+單抗/多抗+相應(yīng)酶標(biāo)二抗檢測(cè)，結(jié)果很怪異，陰陽性全部一樣深。。。（整個(gè)人都不好了。。。） PS：木有條件購買其他抗體，只有一個(gè)多抗和一個(gè)單抗，單獨(dú)驗(yàn)證過單抗、多抗均可以與抗原反應(yīng) 請(qǐng)教大神們這個(gè)怎么解~小女子真的想不出來了~跪謝�。�！  |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
材料，紡織，生物（0856、0710），化學(xué)招生啦
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
0703化學(xué)調(diào)劑 ，六級(jí)已過，有科研經(jīng)歷
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
工科材料085601 279求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
070300化學(xué)319求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
生物學(xué)071000 329分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
0703化學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
304求調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
288求調(diào)劑，一志愿華南理工大學(xué)071005
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
307求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
312求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 我做的Elisa，請(qǐng)大家分析一下為什么會(huì)出現(xiàn)這樣的結(jié)果
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求助一個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 小鼠ELISA和流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)問題求助
已經(jīng)有8人回復(fù)
- ELISA試驗(yàn)不顯色，希望得到大家?guī)椭?/a>
已經(jīng)有41人回復(fù)
- Elisa 實(shí)驗(yàn)時(shí)實(shí)驗(yàn)組的OD值范圍一般是多少的
已經(jīng)有3人回復(fù)
- Elisa試驗(yàn)判斷陰性陽性的問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- ELISA實(shí)驗(yàn)中，抗原和抗體的稀釋液?jiǎn)栴}
已經(jīng)有3人回復(fù)
- ELISA結(jié)果分析
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 有關(guān)ELISA中PBS的濃度
已經(jīng)有10人回復(fù)
- ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果求助
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求助Elisa實(shí)驗(yàn)捕獲后的洗脫問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- elisa洗板問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 關(guān)于ELISA實(shí)驗(yàn)
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 關(guān)于Elisa實(shí)驗(yàn)中吸光度值衰減的問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- ELISA中包被抗原的問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)范圍對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響！
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于ELISA中，使用封閉蛋白的問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】ELIsa間接法中，如何提高陽性值？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于ELISA實(shí)驗(yàn)，用biotin直接包被可以嗎？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)問elisa實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組都顯色怎么解決？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- ELISA實(shí)驗(yàn)問題請(qǐng)教
已經(jīng)有5人回復(fù)
lairena
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 203.3
- 帖子: 45
- 在線: 14.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1214798
- 注冊(cè): 2011-02-27
- 專業(yè): 臨床檢驗(yàn)新技術(shù)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
sandydcy: 金幣+5, ★有幫助 2015-01-29 09:14:32
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
sandydcy: 金幣+5, ★有幫助 2015-01-29 09:14:32
|
你可嘗試把標(biāo)準(zhǔn)抗原加到植物提取物看能不能檢測(cè)出來，要是可以檢測(cè)出來的話，那么標(biāo)準(zhǔn)抗原和植物蛋白可能不是同種東西，至少可以說植物蛋白上面沒有你那個(gè)單抗所需要結(jié)合的表位，而商品化的試劑盒所使用的原料和你的是不一樣的，可能針對(duì)的位點(diǎn)是不一樣的。 你是僅僅想定量還是為了做試劑盒，若僅僅是定量，不如直接用上商品化的東西。 |
3樓2015-01-27 16:08:03
sandydcy
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 51.5
- 帖子: 5
- 在線: 1.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2794943
- 注冊(cè): 2013-11-12
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
9樓2015-01-28 14:04:35
kzwing
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 17.5
- 帖子: 2
- 在線: 2.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 2127370
- 注冊(cè): 2012-11-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞生物學(xué)研究中的新方法
2樓2015-01-27 15:34:51
sandydcy
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 51.5
- 帖子: 5
- 在線: 1.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2794943
- 注冊(cè): 2013-11-12
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
4樓2015-01-27 16:40:53
sandydcy
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 51.5
- 帖子: 5
- 在線: 1.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2794943
- 注冊(cè): 2013-11-12
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
5樓2015-01-27 16:46:15
lairena
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 203.3
- 帖子: 45
- 在線: 14.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1214798
- 注冊(cè): 2011-02-27
- 專業(yè): 臨床檢驗(yàn)新技術(shù)
6樓2015-01-28 09:06:34
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
sandydcy: 金幣+5, ★有幫助 2015-01-29 09:14:08
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
sandydcy: 金幣+5, ★有幫助 2015-01-29 09:14:08
|
我覺得很有可能植物提取物中的蛋白的抗體識(shí)別位點(diǎn)被修飾了，導(dǎo)致抗體無法識(shí)別抗原，如已�；�，磷酸化等。有個(gè)疑問，您的植物提取物中的蛋白是變性的還是天然形式的！ 同時(shí)推薦你個(gè)北京啟維益成科技有限公司的學(xué)習(xí)貼http://www.bioconsumable.com/cn/tech/2011/12-23/tech_22884582.htm |
7樓2015-01-28 11:14:25
sandydcy
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 51.5
- 帖子: 5
- 在線: 1.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2794943
- 注冊(cè): 2013-11-12
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
8樓2015-01-28 14:03:25
feiyue122
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 7 (幼兒園)
- 金幣: 679.2
- 散金: 25
- 帖子: 497
- 在線: 239.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 341213
- 注冊(cè): 2007-04-08
- 專業(yè): 中藥抗炎與免疫藥理
10樓2015-01-29 11:15:20
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 sandydcy 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 化學(xué)工程321分求調(diào)劑 +13 | 大米飯！ 2026-03-15 | 16/800 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +6 | 簡(jiǎn)單點(diǎn)0 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
[考研] 考研求調(diào)劑 +3 | 橘頌. 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +6 | 孔志浩 2026-03-12 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +4 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專碩274一志愿陜西師范大學(xué)求調(diào)劑 +5 | 薛云鵬 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿，福州大學(xué)材料專碩339分求調(diào)劑 +3 | 木子momo青爭(zhēng) 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風(fēng)就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +3 | lemonzzn 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +6 | 妮妮ninicgb 2026-03-15 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +5 | 大米飯！ 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中師范071000，325求調(diào)劑 +6 | RuitingC 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 290分有科研經(jīng)歷，論文在投 +7 | 膩膩gk 2026-03-14 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +4 | 威化餅07 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 336求調(diào)劑 +6 | Iuruoh 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | 球球古力 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] （081700）化學(xué)工程與技術(shù)-298分求調(diào)劑 +12 | 11啦啦啦 2026-03-11 | 35/1750 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 程雨杭 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 270求調(diào)劑 085600材料與化工專碩 +3 | YXCT 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑（食品/專碩） +3 | xc321 2026-03-12 | 6/300 |
|