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sandydcy新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助大家Elisa實(shí)驗(yàn)問題~ 已有3人參與
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我在進(jìn)行Elisa實(shí)驗(yàn)的初步摸索階段，以前從來沒有接觸過相關(guān)實(shí)驗(yàn)，也沒有很系統(tǒng)的學(xué)習(xí)過 希望各位大神們能幫幫忙！先謝過~~~ 前言：1.我使用的是雙抗夾心法，由于沒有兩個(gè)不同位點(diǎn)的單抗，故選擇的是一個(gè)單抗一個(gè)多抗； 2.同時(shí)沒有自己制作酶標(biāo)抗體，而是采用 抗體（兔源）-抗原-抗體（鼠源）-酶標(biāo)羊抗鼠 來檢測； 3.檢測過程中，先用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)純抗原來制作曲線，用Logistic曲線擬合2（四參數(shù)）算法擬合曲線，R方都在0.999以上，我認(rèn)識的一個(gè)之前做過抗體的人說結(jié)果很好（我不太懂）； 4.抗原為細(xì)菌中表達(dá)的蛋白，需要檢測的是轉(zhuǎn)到植物中表達(dá)的該抗原； 現(xiàn)遇到的問題如下： 1. 我用純抗原來做曲線是一個(gè)Logistic曲線擬合2（四參數(shù)）的曲線，不是直線，需要用ElisaCalc這個(gè)軟件來計(jì)算，這樣的結(jié)果對么？ 2. 用純抗原做好曲線后，檢測植物蛋白檢測不出來（已用商品化試劑盒測試確定提取物中含有轉(zhuǎn)入的蛋白）檢測抗原蛋白卻能檢測出來（平行操作）是為什么呢？正反包被都測試過（即包被多抗+抗原+單抗+抗單抗酶標(biāo)二抗；包被單抗+抗原+多抗+抗多抗酶標(biāo)二抗），抗原可以檢測出來，含抗原的植物提取物卻檢不出來；直接包被植物提取物+單抗/多抗+相應(yīng)酶標(biāo)二抗檢測，結(jié)果很怪異，陰陽性全部一樣深。。。（整個(gè)人都不好了。。。） PS：木有條件購買其他抗體，只有一個(gè)多抗和一個(gè)單抗，單獨(dú)驗(yàn)證過單抗、多抗均可以與抗原反應(yīng) 請教大神們這個(gè)怎么解~小女子真的想不出來了~跪謝�。。�  |
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sandydcy
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你可嘗試把標(biāo)準(zhǔn)抗原加到植物提取物看能不能檢測出來，要是可以檢測出來的話，那么標(biāo)準(zhǔn)抗原和植物蛋白可能不是同種東西，至少可以說植物蛋白上面沒有你那個(gè)單抗所需要結(jié)合的表位，而商品化的試劑盒所使用的原料和你的是不一樣的，可能針對的位點(diǎn)是不一樣的。 你是僅僅想定量還是為了做試劑盒，若僅僅是定量，不如直接用上商品化的東西。 |
3樓2015-01-27 16:08:03
sandydcy
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4樓2015-01-27 16:40:53
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