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sandydcy新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助大家Elisa實驗問題~ 已有3人參與
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我在進行Elisa實驗的初步摸索階段，以前從來沒有接觸過相關(guān)實驗，也沒有很系統(tǒng)的學(xué)習(xí)過 希望各位大神們能幫幫忙！先謝過~~~ 前言：1.我使用的是雙抗夾心法，由于沒有兩個不同位點的單抗，故選擇的是一個單抗一個多抗； 2.同時沒有自己制作酶標抗體，而是采用 抗體（兔源）-抗原-抗體（鼠源）-酶標羊抗鼠 來檢測； 3.檢測過程中，先用已知濃度的標準純抗原來制作曲線，用Logistic曲線擬合2（四參數(shù)）算法擬合曲線，R方都在0.999以上，我認識的一個之前做過抗體的人說結(jié)果很好（我不太懂）； 4.抗原為細菌中表達的蛋白，需要檢測的是轉(zhuǎn)到植物中表達的該抗原； 現(xiàn)遇到的問題如下： 1. 我用純抗原來做曲線是一個Logistic曲線擬合2（四參數(shù)）的曲線，不是直線，需要用ElisaCalc這個軟件來計算，這樣的結(jié)果對么？ 2. 用純抗原做好曲線后，檢測植物蛋白檢測不出來（已用商品化試劑盒測試確定提取物中含有轉(zhuǎn)入的蛋白）檢測抗原蛋白卻能檢測出來（平行操作）是為什么呢？正反包被都測試過（即包被多抗+抗原+單抗+抗單抗酶標二抗；包被單抗+抗原+多抗+抗多抗酶標二抗），抗原可以檢測出來，含抗原的植物提取物卻檢不出來；直接包被植物提取物+單抗/多抗+相應(yīng)酶標二抗檢測，結(jié)果很怪異，陰陽性全部一樣深。。。（整個人都不好了。。。） PS：木有條件購買其他抗體，只有一個多抗和一個單抗，單獨驗證過單抗、多抗均可以與抗原反應(yīng) 請教大神們這個怎么解~小女子真的想不出來了~跪謝�。�！  |
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我覺得很有可能植物提取物中的蛋白的抗體識別位點被修飾了，導(dǎo)致抗體無法識別抗原，如已�；�，磷酸化等。有個疑問，您的植物提取物中的蛋白是變性的還是天然形式的！ 同時推薦你個北京啟維益成科技有限公司的學(xué)習(xí)貼http://www.bioconsumable.com/cn/tech/2011/12-23/tech_22884582.htm |
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