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試劑盒提土壤微生物總DNA遇到的問題 已有3人參與
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如題，最近用試劑盒提完后，產(chǎn)品DNA經(jīng)過PCR擴(kuò)增后跑1％的瓊脂糖凝膠電泳，條帶不是很亮，有的樣品條帶都沒有，擴(kuò)增體系的藥品試劑全是新買的，這是怎么回事，請教各位大神，謝謝 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
黃太帝(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2015-02-20 22:01:29
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
黃太帝(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2015-02-20 22:01:29
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分兩部分， 一，提取的DNA是否有過檢測，含量是否足夠，以及是否含有RNA蛋白等雜質(zhì)，如果DNA本身質(zhì)量太差，不要期待PCR能得到很好結(jié)果。 二，PCR擴(kuò)增不出條帶的原因太多了，建議你去從PCR相對應(yīng)的原理和問題去找資料，比如你的引物設(shè)計是否正確，鹽離子濃度是否合適，退火溫度是否正確，以及延伸時長夠不夠， 這些小細(xì)節(jié)都會導(dǎo)致PCR擴(kuò)增不出。 |
2樓2015-01-29 23:16:50
distant616
金蟲 (小有名氣)
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3樓2015-01-30 11:04:18
tomjena2015
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【答案】應(yīng)助回帖
To get rid of humic acid is the key step for obtain high quality total DNA. However, when you try to split DNA and humic acid, you always have a huge loss of DNA during the purification. You need to reach a balance. Get enough DNA for amplification and as little as humic acid which will not inhibit the PCR.  |
4樓2015-02-20 04:16:49
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