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試劑盒提土壤微生物總DNA遇到的問(wèn)題 已有3人參與
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如題，最近用試劑盒提完后，產(chǎn)品DNA經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增后跑1％的瓊脂糖凝膠電泳，條帶不是很亮，有的樣品條帶都沒有，擴(kuò)增體系的藥品試劑全是新買的，這是怎么回事，請(qǐng)教各位大神，謝謝 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
黃太帝(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-02-20 22:01:29
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
黃太帝(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-02-20 22:01:29
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分兩部分， 一，提取的DNA是否有過(guò)檢測(cè)，含量是否足夠，以及是否含有RNA蛋白等雜質(zhì)，如果DNA本身質(zhì)量太差，不要期待PCR能得到很好結(jié)果。 二，PCR擴(kuò)增不出條帶的原因太多了，建議你去從PCR相對(duì)應(yīng)的原理和問(wèn)題去找資料，比如你的引物設(shè)計(jì)是否正確，鹽離子濃度是否合適，退火溫度是否正確，以及延伸時(shí)長(zhǎng)夠不夠， 這些小細(xì)節(jié)都會(huì)導(dǎo)致PCR擴(kuò)增不出。 |
2樓2015-01-29 23:16:50
distant616
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
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- 注冊(cè): 2010-10-01
- 專業(yè): 環(huán)境工程
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
黃太帝(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-02-20 22:01:51
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
黃太帝(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-02-20 22:01:51
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1、提取后的DNA是否跑膠，跑膠后的結(jié)構(gòu)怎么樣。 2、提取后的DNA可以用nanodrop測(cè)量一下濃度和純度，為了確定PCR用量做準(zhǔn)備，考慮DNA是否需要濃縮和稀釋。 3、PCR擴(kuò)展的條件和引物都會(huì)對(duì)結(jié)果又很大的影響，這個(gè)還需要針對(duì)DNA和引物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 |
3樓2015-01-30 11:04:18
tomjena2015
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
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- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
To get rid of humic acid is the key step for obtain high quality total DNA. However, when you try to split DNA and humic acid, you always have a huge loss of DNA during the purification. You need to reach a balance. Get enough DNA for amplification and as little as humic acid which will not inhibit the PCR.  |
4樓2015-02-20 04:16:49
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