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最近做發(fā)酵，遇到個(gè)問(wèn)題無(wú)奈啊，做20L大腸桿菌高密度發(fā)酵，發(fā)酵前檢查菌種都沒(méi)有問(wèn)題，但是發(fā)酵后發(fā)現(xiàn)得到的菌不是我要的，密度很低，發(fā)酵過(guò)程中溶氧開(kāi)始正常，之后升高降不下去，鏡檢菌株形態(tài)沒(méi)問(wèn)題，鋪板沒(méi)見(jiàn)噬菌體，電泳檢查沒(méi)有目的蛋白表達(dá)，發(fā)酵了幾次時(shí)好時(shí)壞，發(fā)酵的菌是甘油菌化板挑形態(tài)正常單菌落做種子，驗(yàn)證過(guò)蛋白表達(dá)正常。懷疑過(guò)空氣系統(tǒng)帶入雜菌，檢查清洗過(guò)，后來(lái)發(fā)酵幾次也是時(shí)好時(shí)壞

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1樓 2015-02-04 22:08:41

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4樓: Originally posted by 小花木蘭 at 2015-02-05 20:04:16
我也有同樣問(wèn)題，原因一直找不到，就是遙瓶有蛋白，一到罐上就無(wú)蛋白。

蛋白有沒(méi)有毒性，上罐發(fā)酵要控制好泄露表達(dá)，很容易出問(wèn)題

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9樓2015-02-06 19:17:21

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你是罐發(fā)酵的么，培養(yǎng)基消的時(shí)間夠不夠，染的是什么菌，罐子有沒(méi)有滲漏，染得菌比需要的菌還多？

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2樓2015-02-04 23:00:59

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2樓: Originally posted by 特異性免疫 at 2015-02-04 23:00:59
你是罐發(fā)酵的么，培養(yǎng)基消的時(shí)間夠不夠，染的是什么菌，罐子有沒(méi)有滲漏，染得菌比需要的菌還多？

罐發(fā)酵，滅菌115度以上30nin，染的具體是什么菌還不清楚，發(fā)酵罐應(yīng)該是不會(huì)漏的，鏡檢看形態(tài)像是大腸桿菌但是電泳幾乎沒(méi)有蛋白表達(dá)

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3樓2015-02-04 23:12:17

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我也有同樣問(wèn)題，原因一直找不到，就是遙瓶有蛋白，一到罐上就無(wú)蛋白。

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4樓2015-02-05 20:04:16

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wangju87c

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鏡檢的圖片發(fā)個(gè)上來(lái)看看，到底是不是大腸桿菌，如果染的雜菌當(dāng)然沒(méi)有表達(dá)

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哥已婚

5樓2015-02-06 09:46:18

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噬菌體檢查多做幾遍，有時(shí)候不容易檢出來(lái)。

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職業(yè)無(wú)分貴賤，做事要有格調(diào)

6樓2015-02-06 09:52:10

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haoyu725527

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1、培養(yǎng)基培養(yǎng)后狀態(tài)什么樣子？明顯渾濁有異味肯定是染雜菌了，是這個(gè)問(wèn)題的話(huà)那要從接種液開(kāi)始著手，整體重新把關(guān)一下
2、滅菌溫度可以調(diào)到121，時(shí)間20-30試試

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7樓2015-02-06 10:13:19

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7樓: Originally posted by haoyu725527 at 2015-02-06 10:13:19
1、培養(yǎng)基培養(yǎng)后狀態(tài)什么樣子？明顯渾濁有異味肯定是染雜菌了，是這個(gè)問(wèn)題的話(huà)那要從接種液開(kāi)始著手，整體重新把關(guān)一下
2、滅菌溫度可以調(diào)到121，時(shí)間20-30試試

發(fā)酵液沒(méi)有沒(méi)有明顯異味，你說(shuō)的渾濁是什么意思，培養(yǎng)基培養(yǎng)后本來(lái)就是渾的，發(fā)酵種子肯定不會(huì)有問(wèn)題，每次發(fā)酵種子我都是分出一些檢驗(yàn)的

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8樓2015-02-06 19:04:16

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4樓: Originally posted by 小花木蘭 at 2015-02-05 20:04:16
我也有同樣問(wèn)題，原因一直找不到，就是遙瓶有蛋白，一到罐上就無(wú)蛋白。

后來(lái)驗(yàn)證是空氣過(guò)濾不行，發(fā)酵過(guò)程中染菌，更換了就好了，還額外加了二級(jí)過(guò)濾，不知道你是不是這樣

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10樓2015-04-03 17:32:46

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