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BBMC-2012

木蟲(chóng) (知名作家)

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[交流] pcr 產(chǎn)物測(cè)序后雙峰，我該怎么辦？

pcr 產(chǎn)物測(cè)序后雙峰，我該怎么辦？

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1樓 2015-03-10 10:43:03

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Forlornhope

新蟲(chóng) (初入文壇)

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BBMC-2012: 金幣+1 2015-03-14 08:46:01

目測(cè)這種換公司也無(wú)濟(jì)于事呀。把問(wèn)題找到才是王道。我覺(jué)得可能有三種原因：一，pcr產(chǎn)物不純，電泳條帶單一并不一定就說(shuō)明沒(méi)有非特異性擴(kuò)增，也可能非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物與目標(biāo)產(chǎn)物size相近，或濃度很低。解決辦法是提高退火溫度做pcr,或直接換pcr引物，再或者可以補(bǔ)訂專(zhuān)門(mén)的測(cè)序引物做測(cè)序反應(yīng)，提高測(cè)序反應(yīng)特異性。二，pcr產(chǎn)物純化做的有問(wèn)題，可補(bǔ)做純化看看。三，就是你送樣的測(cè)序引物有污染，可補(bǔ)送引物測(cè)序。如果你做的是克隆測(cè)序，還有可能是純?cè)陔p克隆，樓主最好上圖，這樣會(huì)比較清楚

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回復(fù)此樓

9樓2015-03-14 07:56:48

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qiaobethy

鐵蟲(chóng) (初入文壇)

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BBMC-2012(金幣+1): 謝謝參與

重測(cè)或者是換公司重測(cè)。

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5樓2015-03-10 13:34:33

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小威斯

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★
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測(cè)序一般的開(kāi)頭和結(jié)尾很容易出現(xiàn)雙峰，重測(cè)吧或者換公司

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7樓2015-03-10 15:52:25

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wrongfeng

新蟲(chóng) (小有名氣)

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你的目的是什么呢？
1、如果PCR產(chǎn)物是特異性的單一條帶，那可能是測(cè)序公司的問(wèn)題，解決方法就是換加公司試試；
2、如果PCR產(chǎn)物非特異性的，可以用連接載體轉(zhuǎn)化測(cè)序的方法。

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8樓2015-03-10 16:10:11

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