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aounao新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求指導(dǎo)！要測(cè)序，長(zhǎng)度為1500左右，是pcr產(chǎn)物直接測(cè)序好還是連接轉(zhuǎn)化測(cè)序比較好？ 已有4人參與
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是對(duì)一個(gè)細(xì)菌測(cè)序，測(cè)序結(jié)果就是用來(lái)做分析，是從各個(gè)地方取樣來(lái)分析序列，分析dna的多樣性，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)等等，是直接用pcr產(chǎn)物測(cè)序好還是連接轉(zhuǎn)化比較好？ 如果用pcr產(chǎn)物測(cè)序的話，是不是必須要提取dna來(lái)跑pcr，因?yàn)橹皽y(cè)序是做的菌液pcr然后連接轉(zhuǎn)化等等。 謝謝師兄師姐的知道！ |
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aounao
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| 最好是質(zhì)�；蚝|(zhì)粒的菌液測(cè)序，這樣可以測(cè)到較為準(zhǔn)確的全長(zhǎng)序列，另外看你的目的基因多態(tài)性區(qū)域，如果在中間也可以PCR產(chǎn)物測(cè)序，但是PCR擴(kuò)增需用保真性高的酶，否則也會(huì)有錯(cuò)配。小建議，僅供參考。 |
7樓2014-10-10 12:02:06
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9樓2014-10-13 09:18:00
王冠傑
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西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-11-26 10:13:48
西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-11-26 10:13:48
| 1500bp一般雙向就能測(cè)出來(lái)，不知道您對(duì)于序列要求高不高，因?yàn)闇y(cè)序前50bp會(huì)存在不準(zhǔn)確的情況。如果要求比較高的話建議構(gòu)建克�。ńㄗh您用PMD18-T，這個(gè)成功率較高，千萬(wàn)不要用PET）用通用引物測(cè)序，如果要求不高的話直接送PCR產(chǎn)物好了，這樣省錢(qián)。通常質(zhì)粒的成功率要比PCR產(chǎn)物高！當(dāng)然送測(cè)之前做一個(gè)酶切鑒定就最好了。不鑒定也行，一般的測(cè)序公司都能根據(jù)測(cè)序結(jié)果分析出你的問(wèn)題的，就是耽擱一些時(shí)間。 |
10樓2014-11-25 21:25:38
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