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mafang68金蟲(chóng) (著名寫手)
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[求助]
HRP標(biāo)記抗體的非特異性反應(yīng) 已有3人參與
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本人做ELISA試劑盒研發(fā)，讓別的公司定制的單抗并標(biāo)記的HRP，現(xiàn)在問(wèn)題就出在HRP標(biāo)記抗體的非特異性反應(yīng)上，先說(shuō)說(shuō)實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果 方法：目的蛋白、非目標(biāo)蛋白、PBS包被；封閉；加HRP標(biāo)記抗體反應(yīng)；顯色；檢測(cè)OD值。 結(jié)果：1。與目的蛋白反應(yīng)很低，OD值在0.2左右；非目標(biāo)蛋白的反應(yīng)較高，OD值在0.6左右。（此為同一次實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果） 2. 復(fù)檢HRP標(biāo)記抗體與非目標(biāo)蛋白反應(yīng)，OD值仍很高，0.7左右。 3. 另包被PBS，與HRP標(biāo)記抗體溫育，竟然也顯色，而且很高，OD值在1.1左右。 以上結(jié)果，不知道怎么解釋，或是哪步出了問(wèn)題，與廠家溝通他們也不知怎么回事。希望各位蟲(chóng)友不吝賜教！非常感謝！ |
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kongxiyang
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【答案】應(yīng)助回帖
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mafang68: 金幣+10, ★★★很有幫助 2015-04-20 09:41:58
mafang68: 金幣+10, ★★★很有幫助 2015-04-20 09:41:58
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1、PBS包被，有信號(hào)值，說(shuō)明整個(gè)反應(yīng)體系污染了，先把包被的所有東西都換掉，再試一次。 2、目的蛋白、非目標(biāo)蛋白之間的關(guān)系，怎么理解有非目標(biāo)蛋白有反應(yīng)。 3、要確定定制的單抗篩選的標(biāo)準(zhǔn)，是否與目的蛋白進(jìn)行反應(yīng)及反應(yīng)的親和力，需要對(duì)方再次核實(shí)。 4、標(biāo)記的時(shí)候，抗體的結(jié)構(gòu)破壞了，造成非特異反應(yīng)， |
5樓2015-03-24 00:24:10
kongxiyang
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