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mafang68金蟲 (著名寫手)
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[求助]
HRP標(biāo)記抗體的非特異性反應(yīng) 已有3人參與
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本人做ELISA試劑盒研發(fā),讓別的公司定制的單抗并標(biāo)記的HRP,現(xiàn)在問題就出在HRP標(biāo)記抗體的非特異性反應(yīng)上,先說說實驗方法和結(jié)果 方法:目的蛋白、非目標(biāo)蛋白、PBS包被;封閉;加HRP標(biāo)記抗體反應(yīng);顯色;檢測OD值。 結(jié)果:1。與目的蛋白反應(yīng)很低,OD值在0.2左右;非目標(biāo)蛋白的反應(yīng)較高,OD值在0.6左右。(此為同一次實驗的檢測結(jié)果) 2. 復(fù)檢HRP標(biāo)記抗體與非目標(biāo)蛋白反應(yīng),OD值仍很高,0.7左右。 3. 另包被PBS,與HRP標(biāo)記抗體溫育,竟然也顯色,而且很高,OD值在1.1左右。 以上結(jié)果,不知道怎么解釋,或是哪步出了問題,與廠家溝通他們也不知怎么回事。希望各位蟲友不吝賜教!非常感謝! |
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1、PBS包被,有信號值,說明整個反應(yīng)體系污染了,先把包被的所有東西都換掉,再試一次。 2、目的蛋白、非目標(biāo)蛋白之間的關(guān)系,怎么理解有非目標(biāo)蛋白有反應(yīng)。 3、要確定定制的單抗篩選的標(biāo)準(zhǔn),是否與目的蛋白進(jìn)行反應(yīng)及反應(yīng)的親和力,需要對方再次核實。 4、標(biāo)記的時候,抗體的結(jié)構(gòu)破壞了,造成非特異反應(yīng), |
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