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心悅有天銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
請問DNA提取的結(jié)果這樣的原因 已有1人參與
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求助各位，我使用16s rDNA鑒定一株細(xì)菌，現(xiàn)在剛進(jìn)行了第一步，按照某試劑盒說明提取基因組DNA，紫外測得提取的DNA樣品，A260/A280為2.22，A260為1.946，核酸濃度為97.3 ng/μL。有幾個(gè)問題： （1）不是一般A260/A280在1.7-1.9之間是DNA純度比較高，請問我這個(gè)為什么還大于2？是RNA污染嗎？ （2）這個(gè)結(jié)果可以直接用于接下來的PCR嗎？ （3）下面照片是樣品的峰形圖，為什么不是呈現(xiàn)最高峰的那種？ 另（4）接下來PCR的引物是通用引物27F和1492R，但看一些文獻(xiàn)里這兩個(gè)引物還有所差異？ 沒接觸過分子生物學(xué)，希望做過的筒子多度指導(dǎo)，謝了~~ DNA提取結(jié)果.jpg |
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心悅有天
銅蟲 (初入文壇)
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3樓2015-05-07 16:34:33
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【答案】應(yīng)助回帖
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-07 22:08:07
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A260/A280和A260/A230是核酸純度的指示值，純度好的DNA，在pH7-8.5 下其比值應(yīng)該在2.0 或2.5，A260 / A280的比值， 用于評估樣品的純度， 因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80 nm。 純凈的樣品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。 A230是多肽、芳香基團(tuán)、苯酚和一些碳?xì)浠衔锏奈舛龋珹230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0 。A280是蛋白質(zhì)的吸光度。 你的A260/A230 是0.29? 這樣的話不建議你PCR |
2樓2015-05-07 08:43:18
4樓2015-05-07 20:44:57
baichi121234
禁蟲 (職業(yè)作家)
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5樓2015-05-07 22:12:33
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