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yueyue0520金蟲 (小有名氣)
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[求助]
巰基活性的測定：簡化的巰基試劑（DTNB）法
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巰基活性的測定：簡化的巰基試劑（DTNB）法 巰基試劑的配置：稱取DTNB 0.0594 g，鹽酸胍 0.0172 g，EDTA 0.0112 g 用0.1 mol/L PBS試劑溶解定容至100 mL。 將樣品配成100 uL溶液，加入20 uL 1.2 mol/L HCl和400 uL 0.1 mol/L EDTA反應10 min去除金屬，加入200 uL巰基試劑，混勻3 min使MT變性后與DTNB形成黃色絡合物，用0.1 mol/L PBS pH7.3稀釋至6 mL，在412 nm處測紫外吸收值。用C=DA/ε（ε=1.23×104（mol/L）-1•cm-1）測算巰基濃度。 請問 公式C=DA/ε（ε=1.23×104（mol/L）-1•cm-1）中D代表什么 謝謝 |
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zzlaile123
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測定總巰基含量時，15 mg蛋白樣品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 緩沖液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。測定自由巰基含量時，15 mg樣品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 緩沖液中，而后加入50 μL Ellman 試劑 （DTNB, 即5,5-二硫基雙2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 緩沖液，4 mg/mL），在25℃條件下保溫反應60 min, 離心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 處測定吸光值，以含Ellman 試劑的Tris-Gly 緩沖液為空白對照。 巰基含量的計算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去試劑空白后樣品的吸光度值 D—稀釋倍數(shù) C—樣品濃度（mg/mL） 問題1：上述公式中稀釋倍數(shù)D是怎么算的（具體的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 問題2：我測的物質(zhì)為毛發(fā)固體樣品，二硫鍵含量在350μmol/g附近，此種測試方法是否具有可行性 問題3：由于毛發(fā)樣品中含有非水溶性蛋白，又沒喲測量二硫鍵含量的更好的方法 如解答必重謝 |
3樓2015-10-07 21:23:38
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