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[求助]
關(guān)于原核表達(dá)后，WB條帶不單一的問題。請大神幫忙！ 已有2人參與
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最近好不容易表達(dá)出蛋白，進入純化。載體用的pET-32a，有his標(biāo)簽，前幾天第一次搖了500ml，嘗試掛了ni柱。洗脫下來后跑了電泳。結(jié)果如下： 蛋白泳道從左到右依次是：1.M 2.破碎后蛋白上清原液 3.流穿 4.洗脫 5-10分別是20,50,100,200,500mM以及1M咪唑洗脫 maker 從上到下分別是116,66,45,35,25,18,14. 可以看到在50和100mM咪唑濃度時，我的蛋白有被大量洗脫下來。 然后在跑膠的同時，用his抗體做了WB，結(jié)果比較奇怪，也希望大家?guī)臀曳治鲆幌拢?br /> WB我是間隔泳道點樣的。M緊挨著是pET-32a空載的上清，然后間隔一個泳道為有我質(zhì)粒菌的上清。最后一道是第一圖的100mM咪唑洗脫。 考染的圖只看前六個泳道，第六泳道是第一圖的100mM咪唑洗脫跑的。 那么問題來了。his抗體雜出來條帶按理說比較單一。為何我的會在目的條帶附近出現(xiàn)三個條帶呢？是蛋白有降解？還是二硫鍵錯配？ 請大神指導(dǎo)！感激不盡！ |
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