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xynlwt新蟲(chóng) (初入文壇)
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SSR預(yù)實(shí)驗(yàn)熒光帶不上 已有2人參與
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| 如題,SSR的預(yù)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)做了很久,熒光基團(tuán)總是加不到目的片段上,而是加在二聚體或者其他雜帶上,20ul和10ul體系都能P出來(lái),用的酶是天根的TAQ MIX,引物部分試過(guò)三種都失敗了,其他水和DNA的比例問(wèn)題不大。1),F(xiàn)引物:M13F引物:修飾基團(tuán):R引物=2:3:5:10。2),F(xiàn)引物:M13F引物:修飾基團(tuán):R引物=0.5:0.5:9:10。這種熒光加在目的片段上一點(diǎn)點(diǎn),峰極低,幾乎看不見(jiàn)。3),用了兩輪,第一輪,M13F引物:R=1:1。第一輪產(chǎn)物用作第二輪模板,第二輪引物比例為,修飾基團(tuán):R引物=1:1。峰還是很低,要么就是依然加在比較短的雜帶上。最后想看看正常情況到底應(yīng)該什么樣,就合了一條直接把修飾基團(tuán)加在F引物上的引物,這次確實(shí)加到了目的片段上,但是這種方法太貴了,預(yù)實(shí)驗(yàn)的話會(huì)遠(yuǎn)超預(yù)算,只有預(yù)實(shí)驗(yàn)先做好了正式實(shí)驗(yàn)再用,所以請(qǐng)大神們幫我看看怎樣能把這個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)部分做出來(lái),謝了! |
新蟲(chóng) (初入文壇)
新蟲(chóng) (初入文壇)
金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
| 這個(gè)效果肯定沒(méi)有直接標(biāo)記在引物上好,我們?cè)囘^(guò)引物合成的時(shí)候合成長(zhǎng)一點(diǎn)的引物,也就是一端(F或R)的引物在其5‘端加上M13引物,第一次PCR就用這個(gè)擴(kuò)增,然后以擴(kuò)增產(chǎn)物為模板,用熒光標(biāo)記的M13引物和另一端沒(méi)有標(biāo)記的(R或F)引物,再擴(kuò)增一次。效果還行。 |
金蟲(chóng) (初入文壇)
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