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xynlwt新蟲 (初入文壇)
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[求助]
SSR預(yù)實驗熒光帶不上 已有2人參與
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| 如題，SSR的預(yù)實驗已經(jīng)做了很久，熒光基團總是加不到目的片段上，而是加在二聚體或者其他雜帶上，20ul和10ul體系都能P出來，用的酶是天根的TAQ MIX，引物部分試過三種都失敗了，其他水和DNA的比例問題不大。1），F(xiàn)引物：M13F引物：修飾基團：R引物=2：3：5：10。2），F(xiàn)引物：M13F引物：修飾基團：R引物=0.5:0.5:9:10。這種熒光加在目的片段上一點點，峰極低，幾乎看不見。3），用了兩輪，第一輪，M13F引物：R=1:1。第一輪產(chǎn)物用作第二輪模板，第二輪引物比例為，修飾基團：R引物=1:1。峰還是很低，要么就是依然加在比較短的雜帶上。最后想看看正常情況到底應(yīng)該什么樣，就合了一條直接把修飾基團加在F引物上的引物，這次確實加到了目的片段上，但是這種方法太貴了，預(yù)實驗的話會遠超預(yù)算，只有預(yù)實驗先做好了正式實驗再用，所以請大神們幫我看看怎樣能把這個預(yù)實驗部分做出來，謝了！ |
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