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xynlwt新蟲 (初入文壇)
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SSR預(yù)實驗熒光帶不上 已有2人參與
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| 如題,SSR的預(yù)實驗已經(jīng)做了很久,熒光基團總是加不到目的片段上,而是加在二聚體或者其他雜帶上,20ul和10ul體系都能P出來,用的酶是天根的TAQ MIX,引物部分試過三種都失敗了,其他水和DNA的比例問題不大。1),F(xiàn)引物:M13F引物:修飾基團:R引物=2:3:5:10。2),F(xiàn)引物:M13F引物:修飾基團:R引物=0.5:0.5:9:10。這種熒光加在目的片段上一點點,峰極低,幾乎看不見。3),用了兩輪,第一輪,M13F引物:R=1:1。第一輪產(chǎn)物用作第二輪模板,第二輪引物比例為,修飾基團:R引物=1:1。峰還是很低,要么就是依然加在比較短的雜帶上。最后想看看正常情況到底應(yīng)該什么樣,就合了一條直接把修飾基團加在F引物上的引物,這次確實加到了目的片段上,但是這種方法太貴了,預(yù)實驗的話會遠超預(yù)算,只有預(yù)實驗先做好了正式實驗再用,所以請大神們幫我看看怎樣能把這個預(yù)實驗部分做出來,謝了! |
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