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[交流]
電泳實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)交流
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| 做電泳實(shí)驗(yàn)有一段時(shí)間，希望和蟲友們交流一下。實(shí)驗(yàn)時(shí)使用恒流還是恒壓，多大的電流，多高的電壓，對(duì)試驗(yàn)有多大的影響。電泳是保持電泳的溫度在哪個(gè)范圍內(nèi)能更好？我這里暫時(shí)看了郭君嬈的電泳技術(shù)和汪家政的蛋白質(zhì)技術(shù)，還有沒有其他好的電泳書籍呢？ |
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13樓2015-05-22 11:20:20
14樓2015-05-26 14:47:30
15樓2015-06-18 14:29:33
| 經(jīng)驗(yàn)之談 |
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2015-06-19 09:22:42, 598.31 K
16樓2015-06-19 09:23:02
| 濃縮膠和分離膠的PH值不同，前者主要表現(xiàn)為濃縮效用，后者表現(xiàn)為電荷效用和分子篩效用。 濃縮效應(yīng)主要在濃縮膠中完成，濃縮膠的pH6.8，在這個(gè)pH條件下，緩沖液中的HCl的Cl離子幾乎全部解離，Gly的等電點(diǎn)為6.0，僅少數(shù)解離為負(fù)離子，在電場中移動(dòng)速度很慢。酸性蛋白質(zhì)在此pH下解離為負(fù)離子，三類離子的遷移速率為Cl>一般蛋白質(zhì)>Gly，電泳開始后，Cl離子泳動(dòng)快，在其后留下一個(gè)低離子濃度區(qū)。Gly在電場中移動(dòng)很慢，造成移動(dòng)離子的缺乏，于是快慢離子間就形成了一個(gè)缺少離子的高壓區(qū)，在高壓區(qū)內(nèi)所有的負(fù)離子都會(huì)加速移動(dòng)，當(dāng)移到Cl離子區(qū)域時(shí)，高電壓消失，蛋白質(zhì)的移動(dòng)速度慢下來，當(dāng)以上穩(wěn)定狀態(tài)建立后，蛋白質(zhì)樣品在快慢離子間被濃縮形成一個(gè)狹小的之間層，并按蛋白質(zhì)所帶負(fù)電荷量的多少依次排列成帶，濃縮樣品，從濃縮膠進(jìn)入分離膠后，膠的pH升高，Gly的離解度增大，泳動(dòng)率上升，又因?yàn)樗肿有�，故超過所有的蛋白質(zhì)分子，緊跟在Cl離子后，Cl離子遷移后，低離子濃度不再存在，形成了恒定的電場強(qiáng)度，因此，蛋白質(zhì)樣品在分離膠中的分離主要取決于它的電荷性質(zhì)，分子大小和形狀，分離膠的孔徑有一定大小，對(duì)不同相對(duì)質(zhì)量的蛋白質(zhì)來說，通過時(shí)收到的滯阻作用不同，即使靜電荷相等的顆粒，也會(huì)由于這種分子篩的效應(yīng)，把不同大小的蛋白質(zhì)相互分開。 濃縮膠的濃度小，起到濃縮的作用，至濃縮膠和分離膠的界面。 而后，分離膠濃度大，起分離的作用。 |
17樓2015-10-30 15:26:09
簡單回復(fù)
dmbb2樓
2015-05-20 15:28
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小魚兒水中游(金幣+1): 謝謝參與
2015-05-20 15:34
回復(fù)
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2015-05-20 15:34
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假大空5樓
2015-05-20 15:35
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2015-05-20 15:39
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mtw9227樓
2015-05-20 15:42
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xiejf8樓
2015-05-20 15:52
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一
qqllqq9樓
2015-05-20 16:01
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shcj10樓
2015-05-20 16:03
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沐-淺夏11樓
2015-05-20 16:04
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尋找cock12樓
2015-05-20 16:07
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