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[求助]
胰蛋白酶裂解蛋白的條件？ 已有2人參與
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| 請(qǐng)教 胰蛋白酶裂解蛋白的反應(yīng)條件，試了很多條件，效率都比較低？總是感覺(jué)酶的活力比較低，用的是上海生工的胰蛋白酶1:250，或者有什么這個(gè)方面參考文獻(xiàn)的 |
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4樓2017-06-03 10:17:42
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
atom150: 金幣+10, ★有幫助 2015-06-11 08:50:35
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1.不同來(lái)源的胰蛋白酶最適pH、最適溫度、穩(wěn)定性、金屬離子差異都很大的。LZ可以先和生工聯(lián)系搞清楚這個(gè)酶是從哪個(gè)來(lái)源得到的，然后再查找相關(guān)文獻(xiàn)或者說(shuō)明書。 2.如果懷疑買到的胰蛋白酶的活性�？梢栽谝欢囟群蚿H下，以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯為底物檢測(cè)253nm下吸光度的差異換算成酶活來(lái)評(píng)價(jià)一下你買的這個(gè)酶的效價(jià)和商品目錄上貼的是否在一個(gè)數(shù)量級(jí)。 3. 一般蛋白酶水解的效果在不同的底物中差異也是非常大的�？赡苣愕哪繕�(biāo)蛋白確實(shí)不好處理，或者是目標(biāo)蛋白上的切割位點(diǎn)包裹在疏水核心里面無(wú)法水解掉，不知道LZ是做什么的，對(duì)你的蛋白樣品煮沸10分鐘再用胰蛋白酶消解應(yīng)該會(huì)有不錯(cuò)的效果。 |
2樓2015-06-06 03:36:02
shenglin01
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3樓2015-06-08 09:53:43
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