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原孟子金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
菌落pcr跟酶切 已有6人參與
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如題，最近一直在做pcr-rflp,前幾周是轉(zhuǎn)化長(zhǎng)不出菌來(lái)，這次好不容易長(zhǎng)菌了，但是菌落pcr圖譜亮帶又不是很亮，又挑了一些菌試了一下，還是這樣。酶切試了一下幾乎只有兩條亮帶，跑了大約一個(gè)半小時(shí)，110V電壓，蟲(chóng)子們，給點(diǎn)意見(jiàn)，哪里做錯(cuò)的節(jié)奏，不想再重新開(kāi)始了，真的。。。都快崩潰了做實(shí)驗(yàn)做的，頭暈 612.jpg jlpcr612.jpg mq612.jpg |
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2樓2015-06-13 07:07:41
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原孟子(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-06-15 22:54:04
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你的菌落PCR貌似都不對(duì)呀，無(wú)論產(chǎn)物大小，菌落PCR的帶應(yīng)該是很單一很亮才對(duì)的啊 好的菌液PCR圖是這樣的 鏈接: http://pan.baidu.com/s/1dD0Hxlf 密碼: g5qn |
3樓2015-06-13 10:59:06
原孟子
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8樓2015-06-15 23:20:36
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9樓2015-06-16 08:48:51
zhangyo
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原孟子: 金幣+66, ★★★很有幫助 2015-06-24 11:02:45
原孟子: 金幣+66, ★★★很有幫助 2015-06-24 11:02:45
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個(gè)人建議： 1）PCR產(chǎn)物一定要好，濃度足夠，條帶單一，可回收之后使用，盡量要新鮮。 2）酶的選擇，有的酶雖然文獻(xiàn)推薦的挺多，但不見(jiàn)得對(duì)所有樣品都好用，選用4堿基酶，最好有自己的測(cè)序結(jié)果，看看序列上到底有多少酶切位點(diǎn)。（你這個(gè)明顯的位點(diǎn)少，基本所有的菌都是那一兩個(gè)酶切點(diǎn)，所以切出來(lái)都一樣） 3）單切不好用是，可考慮雙切。 |
10樓2015-06-16 14:30:46
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