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wangweijian

金蟲 (小有名氣)

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[求助] 熒光PCR陰性對(duì)照跑電泳有條帶

我做的是Taqman 熒光定量PCR，假陽(yáng)性很嚴(yán)重，陰性對(duì)照加水作為模板，Ct值30左右，有時(shí)30以內(nèi)，跑瓊脂糖凝膠電泳有淡淡的條帶，能明顯看出來(lái)，求各位分析下原因及采取何種對(duì)策才能消除假陽(yáng)性？我自己也琢磨了些原因，請(qǐng)各位看看對(duì)不對(duì)。

1.引物、探針的特異性不好，換引物探針；

2.調(diào)整PCR反應(yīng)體系，如減少酶的用量、Mg離子濃度，降低PCR擴(kuò)增效率，但是會(huì)付出降低靈敏度的代價(jià)；

3.系統(tǒng)性的對(duì)PCR環(huán)境進(jìn)行政治，這點(diǎn)不知大家有何良策？

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1樓 2015-07-04 11:11:43

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