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xianglixie3銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
pcr擴(kuò)增后 電泳后條帶不對(duì) 請(qǐng)大俠幫忙! 已有3人參與
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下面是我的電泳圖 紅框里是我的問(wèn)題條帶 基因原長(zhǎng)是2900BP左右 PCR模板 是連了T載體的質(zhì)粒 酶切是可以獲得目的基因的 就是 紅框后面的酶切條帶 但是pCR得不到目的條帶 我重新提取了野生型的DNA 也沒(méi)有擴(kuò)增出目的條帶 我用的酶有primier start 普通TAQ也沒(méi)有。。。 求解�。。。。。。。。。。。。。�1  2015.6.11 sdp37 sdp27 hmg pcr2.jpg 2015.6.11 sdp37 sdp27 hmg pcr2.jpg |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-07-10 21:06:29
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-07-10 21:06:29
| 你說(shuō)的問(wèn)題條帶是什么意思？是你的目的條帶嗎？2900bp也不算長(zhǎng)啊，引物模板退火溫度都是要考慮的，質(zhì)粒作為模板擴(kuò)增也很常見，應(yīng)該不會(huì)有問(wèn)題吧（你自己看看）引物也得你自己驗(yàn)證了，，可以使用hot start taq酶擴(kuò)增試試看，改用熱啟動(dòng)PCR的方法，高保真酶可能會(huì)讓模板降解吧 |
2樓2015-07-10 10:11:44
xianglixie3
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3樓2015-07-10 10:52:45
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6樓2015-07-10 16:22:27
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10樓2015-07-13 11:42:21
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