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xiatianli888金蟲 (初入文壇)
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請(qǐng)教Western-Blot的抗體選擇方法？聽說題目要長(zhǎng) 已有1人參與
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| 各位的大神，小妹最近準(zhǔn)備做Western-Blot，但是抗體選擇上有問題，我做的融合蛋白中僅是一個(gè)已有蛋白的結(jié)構(gòu)域多肽，請(qǐng)問還能用原蛋白一抗么？如果不能，應(yīng)該怎樣訂購(gòu)這種結(jié)構(gòu)域多肽的蛋白捏~多謝~ |
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xiatianli888
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2樓2015-07-16 11:29:24
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【答案】應(yīng)助回帖
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西門吹雪170: 金幣+5, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-07-16 14:42:48
西門吹雪170: 金幣+5, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-07-16 14:42:48
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多肽在溶液中的構(gòu)象并不穩(wěn)定，更要使用序列變位制備單克隆抗體。 α-Helix、β-sheet strand和 Random coil是三種最常見的出現(xiàn)在蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用或者蛋白質(zhì)的亞基-蛋白質(zhì)的亞基的締合體之間的接觸表面的二級(jí)結(jié)構(gòu)。而且各種蛋白質(zhì)之間或者亞基之間相互作用的接觸表面的所有的氨基酸殘基屬于各種螺旋結(jié)構(gòu)（包括α-Helix）的比例可能相當(dāng)高，甚至在一些例子中會(huì)高達(dá)接近50%，β-sheet strand, Random coil占有氨基酸殘基數(shù)量的百分比則大致為20%。當(dāng)然對(duì)于不同的蛋白質(zhì)之間或不同的亞基之間數(shù)值變化很大。對(duì)于多肽-蛋白質(zhì)相互作用的接觸表面的二級(jí)結(jié)構(gòu)類型大致也是如此，可能各類二級(jí)結(jié)構(gòu)的占有的氨基酸的比例會(huì)有些不同。所以我們需要簡(jiǎn)要的分析一下：多肽處于溶液狀態(tài)時(shí)，其包含的α-Helix、β-sheet strand和 random coil這三種的典型的二級(jí)結(jié)構(gòu)是否比較穩(wěn)定，如果它們本身就不穩(wěn)定，也就說明了多肽鏈溶液狀態(tài)的二級(jí)結(jié)構(gòu)是不穩(wěn)定的，那么如此無論用多么先進(jìn)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)軟件和分子對(duì)接軟件都無法得到唯一的計(jì)算模擬結(jié)果，因?yàn)檫@一結(jié)果本身就不存在。 |
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xiatianli8884樓2015-07-16 12:56:15
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 可以嘗試在蛋白序列中分析挑選其中的幾條相對(duì)您可能需要的肽段的短肽，每個(gè)短肽大概在15AA，去制備多抗 |
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5樓2015-07-16 17:23:56
xiatianli888
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6樓2015-07-16 22:14:53
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【答案】應(yīng)助回帖
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xiatianli888: 金幣+20, ★★★很有幫助 2015-07-16 23:04:22
xiatianli888: 金幣+20, ★★★很有幫助 2015-07-16 23:04:22
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這個(gè)可是真不好說，要看具體的抗原表位是不是能不能形成，最起碼要暴露在分子表面上，你可以用空間結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)一下。 D. J. Rigden Edits, From Protein Structure to Function with Bioinformatics(2009) http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=6382178&fpage=1&target=blank |
7樓2015-07-16 22:21:39
xiatianli888
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8樓2015-07-17 15:37:01
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
9樓2015-09-19 15:19:50
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