 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 4341 | 回復(fù): 32 | ||
白色實(shí)驗(yàn)服新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
測定土壤酶活力過程中的問題 已有3人參與
|
|
|
小弟最近在測定土壤酶活力，常見的幾種酶。像蔗糖酶（比色法）、脲酶（苯酚鈉-次氯酸鈉比色法）、蛋白酶（茚三酮比色法）、纖維素酶（硝基水楊酸比色法）等…… 但是，在測定蛋白酶的時(shí)候出現(xiàn)一系列問題如下： 1：1、蛋白酶測定的時(shí)候，實(shí)驗(yàn)組和對照組（無土+無基質(zhì)）全部出現(xiàn)茶色，并沒有出現(xiàn)應(yīng)該出現(xiàn)的藍(lán)紫色，做了四次，全部都是茶色，不知道哪里出現(xiàn)問題了； 2、用酪素做基質(zhì)，波長為500nm，用明膠做基質(zhì)，波長為560nm，請問到底波長用多少合適？ 3、培養(yǎng)結(jié)束后，過濾之前還是之后加入沉淀蛋白質(zhì)的試劑，加入后需不需要離心？離心轉(zhuǎn)速多少？離心在過濾之前還是過濾之后好？ 4、沒有離心，培養(yǎng)后直接過濾，過濾速度很慢（超級慢的那一種），這個現(xiàn)象合理不合理，如果不合理，該怎么做？ 5、用酪素做基質(zhì)，標(biāo)準(zhǔn)曲線用甘氨酸繪制？還是酪氨酸繪制？明膠做基質(zhì)曲線用什么繪制呢？（查閱了很多文獻(xiàn)，方法有的各不相同，希望大神解答……） 我用茚三酮比色法（酪素基質(zhì)），測定波長為500nm；加勒斯江法（明膠基質(zhì)），測定波長為560nm；實(shí)驗(yàn)還是不出結(jié)果，希望蟲友幫助，小弟不勝感激…… 在測定纖維素酶活力的時(shí)候，出現(xiàn)過濾很慢（無法想象的慢，甚至我懷疑過濾都停止了），不知道離心或者用布氏漏斗可以不可以（今天打算試一下的）……或者蟲友有更好的解決辦法。 第一次發(fā)帖，不便之處請見諒。剛簽到三天，金幣不多……希望大家能幫小弟解決這些問題，在線等。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
276求調(diào)劑。有半年電池和半年高分子實(shí)習(xí)經(jīng)歷
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
接收2026碩士調(diào)劑(學(xué)碩+專碩)
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料與化工考研調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
081700 調(diào)劑 267分
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境，總分308求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
336化工調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
08工學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
263求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
298求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
考研化學(xué)308分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 【分享】2009年注冊環(huán)保工程師基礎(chǔ)考試大綱
已經(jīng)有11人回復(fù)
白色實(shí)驗(yàn)服
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 26.5
- 帖子: 11
- 在線: 6.2小時(shí)
- 蟲號: 4032728
- 注冊: 2015-08-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 林業(yè)研究的新技術(shù)與新方法
9樓2015-08-29 20:22:40
白色實(shí)驗(yàn)服
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 26.5
- 帖子: 11
- 在線: 6.2小時(shí)
- 蟲號: 4032728
- 注冊: 2015-08-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 林業(yè)研究的新技術(shù)與新方法
16樓2015-10-11 22:38:53
白色實(shí)驗(yàn)服
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 26.5
- 帖子: 11
- 在線: 6.2小時(shí)
- 蟲號: 4032728
- 注冊: 2015-08-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 林業(yè)研究的新技術(shù)與新方法
2樓2015-08-25 12:51:38
我是一粒沙
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 21.5
- 帖子: 36
- 在線: 35.1小時(shí)
- 蟲號: 2485840
- 注冊: 2013-05-28
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
3樓2015-08-25 14:04:53
autumuer
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 845.6
- 帖子: 98
- 在線: 21.1小時(shí)
- 蟲號: 2586168
- 注冊: 2013-08-07
- 專業(yè): 作物栽培與耕作學(xué)
4樓2015-08-25 16:07:45
白色實(shí)驗(yàn)服
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 26.5
- 帖子: 11
- 在線: 6.2小時(shí)
- 蟲號: 4032728
- 注冊: 2015-08-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 林業(yè)研究的新技術(shù)與新方法
|
土壤脲酶的測定方法（苯酚鈉—次氯酸鈉比色法） 1、試劑 1）甲苯； 2）10%尿素：稱取10g尿素，用水溶至100ml； 3）檸檬酸鹽緩沖液（PH6.7）：184g檸檬酸和147.5g氫氧化鉀（KOH）溶于蒸餾水。將兩溶液合并（會暴沸，混合時(shí)要注意），用1mol/LNaOH將PH調(diào)至6.7，用水稀釋定容至1000ml； 4）苯酚鈉溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀釋至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。將A、B溶液保存在冰箱中。使用前將A液、B液各20ml混合，用蒸餾水稀釋至100ml； 5）次氯酸鈉溶液：用水稀釋試劑，至活性氯的濃度為0.9%，溶液穩(wěn)定； 6）氮的標(biāo)準(zhǔn)溶液： 精確稱取0.4717g硫酸銨溶于水并稀釋至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的標(biāo)準(zhǔn)液；再將此液稀釋10倍（吸取10ml標(biāo)準(zhǔn)液定容至100ml）制成氮的工作液（0.01mg/ml）。 2、操作步驟 稱取5g土樣于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振蕩均勻，15min后加10ml10%尿素溶液和20ml PH 6.7檸檬酸鹽緩沖溶液，搖勻后在37℃恒溫箱培養(yǎng)24小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束后過濾，過濾后取1ml濾液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚鈉溶液和3ml次氯酸鈉溶液，隨加隨搖勻。20min后顯色，定容。1h內(nèi)在分光光度計(jì)與578nm波長處比色。（靛酚的藍(lán)色在1h內(nèi)保持穩(wěn)定）。 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：在測定樣品吸光值之前，分別取0、1、3、5、7、9、11、13ml氮工作液，移于50ml容量瓶中，然后補(bǔ)加蒸餾水至20ml。再加入4ml苯酚鈉溶液和3ml次氯酸鈉溶液，隨加隨搖勻。20min后顯色，定容。1h內(nèi)在分光光度計(jì)上于578nm波長處比色。然后以氮工作液濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 3、結(jié)果計(jì)算： 以24小時(shí)后1g土壤中NH3－N的毫克數(shù)表示土壤脲酶活性（Ure）。 Ure=（a樣品－a無土－a無基質(zhì)）×V×n／m式中：a樣品為樣品吸光值由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的NH3－N毫克數(shù)；a無土為無土對照吸光值由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的NH3－N毫克數(shù)； a無基質(zhì)為無基質(zhì)對照吸光值由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的NH3－N毫克數(shù)； V為顯色液體積；n為分取倍數(shù)，浸出液體積／吸取濾液體積；m表示烘干土重 |
5樓2015-08-25 16:07:46
白色實(shí)驗(yàn)服
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 26.5
- 帖子: 11
- 在線: 6.2小時(shí)
- 蟲號: 4032728
- 注冊: 2015-08-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 林業(yè)研究的新技術(shù)與新方法
6樓2015-08-25 16:13:48
7樓2015-08-25 16:41:01
白色實(shí)驗(yàn)服
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 26.5
- 帖子: 11
- 在線: 6.2小時(shí)
- 蟲號: 4032728
- 注冊: 2015-08-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 林業(yè)研究的新技術(shù)與新方法
8樓2015-08-25 17:08:36
arbesineja
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 44 (小學(xué)生)
- 金幣: 11260.3
- 散金: 2000
- 紅花: 13
- 帖子: 2231
- 在線: 569.3小時(shí)
- 蟲號: 1856083
- 注冊: 2012-06-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 生態(tài)系統(tǒng)生態(tài)學(xué)
|
蛋白酶對照組貌似就是近于茶色，我懷疑是蛋白酶活性比較低，樓主可以適當(dāng)增加土壤量或者延長培養(yǎng)時(shí)間試試。然后根據(jù)土壤量和時(shí)間調(diào)整計(jì)算公式。纖維素酶因?yàn)榛|(zhì)問題就是很慢只能等著，木有什么好辦法 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2015-08-30 20:14:29
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 白色實(shí)驗(yàn)服 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +12 | 申子申申 2026-03-19 | 18/900 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑院校信息 +6 | CX 330 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 能源材料化學(xué)課題組招收碩士研究生8-10名 +5 | 脫穎而出 2026-03-16 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué)070300 學(xué)碩336求調(diào)劑 +5 | vv迷 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | Auroracx 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 工科0856求調(diào)劑 +3 | 沐析汀汀 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +9 | 煙火先于春 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +11 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)學(xué)碩080502 337求調(diào)劑-一志愿華中科技大學(xué) +4 | 順順順mr 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 294求調(diào)劑材料與化工專碩 +15 | 陌の森林 2026-03-18 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學(xué) ，070300化學(xué)學(xué)碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +4 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 350求調(diào)劑 +5 | weudhdk 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交通 專碩 材料355 本科雙非 求調(diào)劑 +5 | 西南交通專材355 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 261求B區(qū)調(diào)劑，科研經(jīng)歷豐富 +3 | 牛奶很忙 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 086500 325 求調(diào)劑 +3 | 領(lǐng)帶小熊 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿福大288有機(jī)化學(xué)，求調(diào)劑 +3 | 小木蟲200408204 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +3 | 妮妮ninicgb 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料工程（085601）專碩有科研經(jīng)歷三項(xiàng)國獎兩個實(shí)用型專利一項(xiàng)省級立項(xiàng) +6 | 大火山小火山 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風(fēng)就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑
+3
|
zhouzhen654 2026-03-16 | 3/150 |
|