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hxx593847830新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
真菌DNA提取問(wèn)題 已有5人參與
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| 最近在做真菌18S和ITS鑒定，使用液氮研磨、試劑盒提取DNA，已經(jīng)做了一遍沒(méi)有跑出條帶。因?yàn)槲沂侨×?ML菌液，自動(dòng)研磨10min沒(méi)有提取出來(lái)，猜想可能是提取DNA量少的原因。想問(wèn)一下各位，試劑盒說(shuō)是取真菌100mg，真菌菌液培養(yǎng)幾天取樣較好？取樣的話(huà)取多少合適？另外，如果我用自動(dòng)研磨機(jī)研磨多長(zhǎng)時(shí)間好呢？希望有經(jīng)驗(yàn)的大神指導(dǎo)�。� |
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 真菌 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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hxx593847830: 金幣+10, ★★★很有幫助 2015-09-23 15:47:44
hxx593847830: 金幣+10, ★★★很有幫助 2015-09-23 15:47:44
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哈哈，你說(shuō)的這個(gè)實(shí)驗(yàn)我比較熟悉。我做過(guò)，當(dāng)初我也遇到過(guò)同樣的問(wèn)題。解決方法如下； 你可以將生長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng)的菌絲抽濾，用緩沖液漂洗后，在再用液氮碾磨 你也可以將生長(zhǎng)短時(shí)間（菌體未老化）的菌液離心，用緩沖液漂洗后，再用液氮碾磨 如果這兩種方法都不行就改用酶法破壁，效果會(huì)比較好。 到由于你是要做菌種鑒定，對(duì)基因組的質(zhì)量要求不高，所以無(wú)論那種都可以 在樣菌的過(guò)程中，切記要保證沒(méi)有染雜菌 如果還有問(wèn)題再聯(lián)系我 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
9樓2015-09-18 23:47:51
【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-09-15 19:12:41
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量少的原因的話(huà)直接pcr就可以了 。p不出來(lái)就不是量少的問(wèn)題了�？赡軟](méi)有裂解開(kāi)。自動(dòng)研磨沒(méi)用過(guò)。提DNA液氮�；蛘咂胀ㄑ心�，玻璃珠等物理方法應(yīng)該都差不多。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
2樓2015-09-15 13:38:42
小可愛(ài)天
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把你養(yǎng)的菌抽濾，用菌絲體研磨提取做。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
4樓2015-09-15 13:42:03
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7樓2015-09-17 22:28:35
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我的菌是PDA培養(yǎng)5天抽濾得到菌體，干燥箱烘干后用組織研磨器磨成粉末，只需30毫克就足夠了。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
8樓2015-09-18 23:22:09
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5樓2015-09-16 12:41:23
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6樓2015-09-16 12:41:45
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