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悅賞花開花落新蟲 (初入文壇)
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[求助]
蛋白純化不掛柱 已有5人參與
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我的蛋白n端帶有his標(biāo)簽，多以包涵體形式存在，經(jīng)過多種嘗試，目前可以有少量的上清表達(dá)。對(duì)其進(jìn)行純化時(shí)，將填料和上清在4度孵育兩個(gè)小時(shí)，卻發(fā)現(xiàn)沒有掛柱直接流出，求助是什么原因又可以進(jìn)行什么探索。謝謝！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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你好，N端His-tag蛋白不掛NI柱，是一種比較常見的蛋白純化問題，有多種方法可以去嘗試，建議找專業(yè)高效的蛋白表達(dá)純化公司咨詢。 吐露港生物已成功構(gòu)建完整的大腸桿菌原核和酵母細(xì)胞真核的蛋白表達(dá)技術(shù)平臺(tái)，并可以根據(jù)客戶的需求，提供從蛋白表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建、蛋白表達(dá)條件摸索和蛋白純化等一整套服務(wù)。http://tu.jjla.com/service_detail.php?id=154 |
10樓2015-10-12 00:22:37
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2樓2015-10-10 01:24:47
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3樓2015-10-10 09:56:58
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我的也不是完全不掛柱，就是跑膠出來看雜帶多，目的蛋白少，雜帶太多了～蛋白濃度也低～所以就選擇包涵體了～包涵體純化出來后的條帶相當(dāng)漂亮啊。因?yàn)槲覀冏龅氖敲庖撸�，不需要檢測(cè)復(fù)性后活性～我們就直接免疫動(dòng)物了～我也很想知道怎么檢測(cè)～ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2015-10-10 10:03:25
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我的也是雜帶很多，但是我的目的蛋白一點(diǎn)也不掛柱，我一直覺得復(fù)性風(fēng)險(xiǎn)太大，還需要摸索，所以想在上清中純化。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2015-10-10 10:09:08
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你的蛋白在上清中多嗎？我們的重組蛋白是在大腸桿菌中表達(dá)的，低溫低誘導(dǎo)劑長(zhǎng)時(shí)間表達(dá)后，上清中表達(dá)會(huì)多些～我們是用的鎳柱，不掛柱的時(shí)候，就會(huì)選擇再生～冰上搖2小時(shí)結(jié)合～我是轉(zhuǎn)專業(yè)學(xué)這個(gè)的，有些原理可能不怎么清楚，我跟我博士師兄做，他就是這么做的。希望對(duì)你有用。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2015-10-10 10:18:58
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我的蛋白上清中不多，但是可以看到條帶。我的操作和你們的差不多，低溫誘導(dǎo)，兩小時(shí)孵育之類。我會(huì)查閱一下再生相關(guān)的內(nèi)容，謝謝！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2015-10-10 11:59:25
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8樓2015-10-10 12:24:31
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9樓2015-10-11 21:46:20
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