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tianqingzn新蟲 (初入文壇)
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[求助]
鎳柱純化蛋白遇到了些問題,蛋白掛不上柱,怎么辦????求解 已有1人參與
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| 大腸桿菌重組表達(dá)的蛋白,帶有his標(biāo)簽(N端和C端各一個),經(jīng)過超聲波破碎取上清,酶活很高,然后用鎳柱純化粗酶液,開始用的結(jié)合緩沖液加有咪唑,最后的結(jié)果是蛋白沒掛柱,因為第一次收的液體酶活很高,最后用洗脫液收的液體沒有酶活。后來用不加咪唑的結(jié)合緩沖液重新純化蛋白,結(jié)果是掛上少許蛋白,而且最終收的液體測酶活酶活很低,該怎么優(yōu)化純化體系????還是因為蛋白的his標(biāo)簽在蛋白里面包裹沒有暴漏出來,所以掛不上柱,求解,拜托給位前輩了。。! |

木蟲 (正式寫手)


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