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tianqingzn新蟲 (初入文壇)
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[求助]
鎳柱純化蛋白遇到了些問題，蛋白掛不上柱，怎么辦？？？？求解 已有1人參與
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| 大腸桿菌重組表達(dá)的蛋白，帶有his標(biāo)簽（N端和C端各一個），經(jīng)過超聲波破碎取上清，酶活很高，然后用鎳柱純化粗酶液，開始用的結(jié)合緩沖液加有咪唑，最后的結(jié)果是蛋白沒掛柱，因為第一次收的液體酶活很高，最后用洗脫液收的液體沒有酶活。后來用不加咪唑的結(jié)合緩沖液重新純化蛋白，結(jié)果是掛上少許蛋白，而且最終收的液體測酶活酶活很低，該怎么優(yōu)化純化體系？？？？還是因為蛋白的his標(biāo)簽在蛋白里面包裹沒有暴漏出來，所以掛不上柱，求解，拜托給位前輩了�。。。� |
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lpzl
木蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2014-12-18 16:39:07
3樓2014-12-21 00:53:47
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