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quanweizhuce木蟲 (小有名氣)
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[交流]
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的結(jié)果鑒定
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最近在做質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，第一次接觸有很多不懂的地方，幾個(gè)問題想請(qǐng)教大家。 背景： 將新霉素抗性的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入金黃色葡萄球菌內(nèi)。抽提的質(zhì)粒與新制備的金葡菌感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行電轉(zhuǎn)化，結(jié)束后將菌液涂布新霉素抗性平板內(nèi)，37℃培養(yǎng)4天后，只有一塊平板長(zhǎng)出2個(gè)菌落  ，經(jīng)觀察兩個(gè)菌落是金葡菌。問題： 在論壇看了其他蟲友關(guān)于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的評(píng)論，“抗生素的活性只能維持一段時(shí)間，常見的氨芐青霉素（Amp）在37℃大約能維持16小時(shí)（也就是過夜），時(shí)間太長(zhǎng)后就失效了。一般抗生素只能抑制雜菌生長(zhǎng)，并不能殺死它們，所以抗生素失效之后，雜菌就能長(zhǎng)起來了。” 金葡菌通常涂板24小時(shí)肯定能長(zhǎng)出來，可是我轉(zhuǎn)化后涂板很久才長(zhǎng)出兩個(gè)菌落，時(shí)間是明顯延長(zhǎng)的，請(qǐng)問，新霉素的抗性也是只能維持一段時(shí)間嗎？大約多久？ |
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2樓2015-10-30 16:55:35
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四天時(shí)間太長(zhǎng)了，一般過夜就長(zhǎng)起來了，那兩個(gè)很有可能是雜菌了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2015-10-30 21:28:55
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你是怎么轉(zhuǎn)化到金葡里面的？電轉(zhuǎn)？我用過氨芐 氯霉素 卡那霉素和紅霉素的篩選，一般轉(zhuǎn)化成功的五到六個(gè)小時(shí)都能長(zhǎng)出來，最多過夜也長(zhǎng)出來了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2015-10-31 22:34:08
quanweizhuce
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5樓2015-11-01 09:03:09
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6樓2015-11-01 09:03:18
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7樓2015-11-01 09:05:17
8樓2015-11-01 10:31:37
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我做的不是金葡，也可能你的感受態(tài)細(xì)胞不太好或者電轉(zhuǎn)條件不對(duì)，這方面你看相關(guān)文獻(xiàn)就好了，或者你質(zhì)粒濃度不對(duì)，我看你質(zhì)粒是從金葡里提出來的，質(zhì)粒濃度測(cè)過了沒？為什么不用大腸桿菌擴(kuò)增質(zhì)粒��？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2015-11-01 11:59:31
danahi
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10樓2015-12-22 15:31:18
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