 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1796 | 回復: 4 | ||
[求助]
RACE 反轉(zhuǎn)錄求助 已有1人參與
|
|
本人大三學生，等著實驗結果寫論文申請出國…… 現(xiàn)在卡在RACE上。 提取的mRNA經(jīng)過1%瓊脂糖電泳檢驗，結果是有兩條亮帶，很少降解。 然后反轉(zhuǎn)錄上有以個問題： 隔壁實驗室給的兩個接頭引物BOD（3‘端有GGG的）和AOLP（3’端有poly T的），然后用的反轉(zhuǎn)錄試劑盒是Promega的A5000 根據(jù)說明書，采用以下操作： totalRNA 5μg AOLP 1ug 無核苷酸水（試劑盒提供） 補全到5ul 70℃ 預變性（應該是這樣的目的） 5 min后立即冰浴5 min，然后任意速度離心10 s（沒有寫出速度要求，通常用7500 rpm） 反應體系配制： 5X 的Reaction Buffer 40 ul MgCl2 （聽說Mg越多雜帶越少。但是擴增的條帶越不亮） 4 ul PCR Nucleotide Mix 10 ul RRI 0.5 ul 反轉(zhuǎn)錄酶（GoScript Recerse Transcriptase） 10 ul BDO 1 ul 用提供的Water調(diào)制 15 .0ul 冰上混合變性的RNA和反應體系 25℃ 5min 42℃ 1h 70℃ 15min 現(xiàn)在問題是，隔壁實驗室給的體系和我買的體系稍有不同， 他們用37℃（DNase Buffer、RQ DNase，RRI，RNA和水配制成體系）處理后用加 AOLP和stop solution 70℃孵育（ 終止延伸用，說讓后來的BOD結合上去） 然后在進行第一鏈cNDA合成，這時候才加BDO。 不知道以我的那種方法來做能不能達到同樣的效果。就在在反轉(zhuǎn)錄的時候在5‘端加上BDO序列。 求助求助！��！ |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有279人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 是個小白，求助關于pcr，跑電泳，沒p出條帶，點樣孔會亮。
已經(jīng)有12人回復
- 高GC含量目的基因的克隆
已經(jīng)有23人回復
- 3‘race 求助
已經(jīng)有6人回復
- race求助各位牛人指點~先謝了
已經(jīng)有2人回復
- 緊急求助5‘RACE（測序結果問題）
已經(jīng)有10人回復
- 5'Race 求助
已經(jīng)有3人回復
- pcr，RACE,低表達量基因的克隆
已經(jīng)有8人回復
- 【求助/交流】關于RACE
已經(jīng)有3人回復
- 【求助/交流】5-RACE問題
已經(jīng)有14人回復
- 【求助/交流】逆轉(zhuǎn)錄第一鏈cDNA是否成功了，幫忙看一下
已經(jīng)有5人回復
zhangyao7255
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 478.7
- 紅花: 4
- 帖子: 109
- 在線: 29.2小時
- 蟲號: 640444
- 注冊: 2008-10-29
- 性別: GG
- 專業(yè): 發(fā)育生物學
2樓2015-11-02 15:04:40
3樓2015-11-02 22:40:52
zhangyao7255
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 478.7
- 紅花: 4
- 帖子: 109
- 在線: 29.2小時
- 蟲號: 640444
- 注冊: 2008-10-29
- 性別: GG
- 專業(yè): 發(fā)育生物學
4樓2015-11-02 23:19:15
5樓2015-11-03 22:40:26
相關版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 引路者 的主題更新
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 考研化學308分求調(diào)劑 +3 | 你好明天你好 2026-03-23 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 070300，一志愿北航320求調(diào)劑 +3 | Jerry0216 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 一志愿東華大學化學070300，求調(diào)劑
+7
|
2117205181 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +12 | 申子申申 2026-03-19 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 305分求調(diào)劑（食品工程） +4 | Sxy112 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | Zhangbod 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 招收博士1-2人 +3 | QGZDSYS 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 生物學一志愿985，分數(shù)349求調(diào)劑 +4 | zxts12 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +10 | Faune 2026-03-21 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 資源與環(huán)境 調(diào)劑申請(333分) +5 | holy J 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +11 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | shxchem 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | .m.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +3 | Jack?k?y 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +4 | ydfyh 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 324分 085600材料化工求調(diào)劑 +4 | llllkkkhh 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 南京大學化學376求調(diào)劑 +3 | hisfailed 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 司空. 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿武漢理工材料工程專碩調(diào)劑 +9 | Doleres 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿南京航空航天大學289分 +3 | @taotao 2026-03-19 | 3/150 |
|