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zoe回望鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[求助]
真菌PCR沒有條帶，求大神相助！ 已有2人參與
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我才開始做DNA提取，提的是霉菌一類的，總DNA有條帶，看得見，但是PCR之后沒有條帶。 引物用的是its1和its4（老師在上海生工買的，its1的Tm值是61.9攝氏度，its4的Tm值是55.8攝氏度），用的是mix，一共50ul，模板2ul，mix25ul，引物各1ul，用滅菌超純水不足50ul。 程序1是：93度，3min； 94度，1min；52度,1min;72度，1.5min（35個(gè)循環(huán)） 72度，10min。 程序2是：45度，10min； 94度，1min；57度,45s;72度，1min（35個(gè)循環(huán)） 72度，10min。 這個(gè)兩個(gè)程序我都沒有任何條帶，求有經(jīng)驗(yàn)的大神指導(dǎo)！萬分感謝��！ |
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2樓2016-01-20 16:56:51
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您說的兩個(gè)降落，我都沒有用過的，請(qǐng)問是0.5度這樣降嗎？非常感謝，請(qǐng)問，引物對(duì)嗎？在總DNA的時(shí)候確實(shí)是看的見條帶的，非常感謝. 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-01-21 16:44:39
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4樓2016-01-21 17:01:13
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5樓2016-10-22 12:58:33
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梯度是pcr儀上的，你設(shè)置溫度，比如52.60中間就會(huì)有很多溫度，把管子放在對(duì)應(yīng)的位置就是所需溫度。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2016-10-22 16:46:54
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8樓2016-12-02 23:43:12
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9樓2021-04-08 01:26:36
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