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fuyuandj86版主 (著名寫手)
己所不欲，勿施于人
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[求助]
蛋白誘導(dǎo)表達低或不表達
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以前表達蛋白一直是包涵體的問題,這次頭一次遇到誘導(dǎo)不出來的: 第一張圖是IPTG誘導(dǎo)前和誘導(dǎo)后的對比,幾乎沒有差別.蛋白大小應(yīng)該是92kDa,只能看到很淺的條帶 可以肯定的是蛋白是可溶的,因為以前表達過這個蛋白,這一次我在蛋白N端的his-tag后面添了幾個氨基酸,增加了一個酶切位點,便于純化后把histag切掉,結(jié)果誰想就不表達了 表達條件是LB, 19度,1mM IPTG,過夜 BL21 DE3 codon plus, pet28質(zhì)粒 其實以前這個蛋白一直有誘導(dǎo)表達量不好的問題. 第2張圖,右邊的7個泳道是同樣這個蛋白但是我沒有在histag后面添加個酶切位點.左邊7個泳道是另一個蛋白用同一個載體質(zhì)粒,完全一致的插入位點和完全一致的誘導(dǎo)條件,就誘導(dǎo)表達得很好  親們有什么優(yōu)化意見嗎?histevh1induction.jpg ecatbody_and_hish1.jpg [ Last edited by fuyuandj86 on 2013-8-9 at 22:47 ] |
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yimingwang
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fuyuandj86
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