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一起來(lái)旅行銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
PCR擴(kuò)增結(jié)果有9個(gè)突變位點(diǎn) 已有3人參與
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我用的是地方豬的背最長(zhǎng)肌的cDNA為模板，2?Taq MasterMix來(lái)擴(kuò)增的CDS區(qū)，目的片段1121bp，再連t載體最后菌液pcr后去測(cè)序，結(jié)果與ncbi上的原始序列比對(duì)后，發(fā)現(xiàn)了9個(gè)突變位點(diǎn)，是不是有點(diǎn)多�。� @biostar2009 @飛約瘋?cè)嗽?/u> @wizardfan @youlinglyw 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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yuhan131481
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-11-11 07:16:47
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-11-11 07:16:47
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1. 用2×Q5PCRmix或者KAPA HIFI PCRmix擴(kuò)下試試，這兩種酶的保真性是taq酶的100倍。 2. 把DNA序列翻譯成氨基酸序列，比對(duì)下氨基酸序列，看看是不是同義突變。 3. 確定地方豬與文獻(xiàn)的來(lái)源一樣嗎，會(huì)不會(huì)本來(lái)基因就有一定的差異，只不過(guò)該基因代表的蛋白功能是相似的。就是蛋白結(jié)構(gòu)域是保守的，功能一樣，基因序列有細(xì)微差別。 |
4樓2016-11-09 18:06:03
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2樓2016-11-09 17:49:09
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-11-11 07:16:31
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-11-11 07:16:31
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要看原始測(cè)序圖AB1文件，就算他給你判讀為txt文件了，你也要看，假如在兩端有突變是不準(zhǔn)確的，你要重新設(shè)計(jì)引物重新測(cè)那一段(末端) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-11-09 17:59:31
一起來(lái)旅行
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5樓2016-11-09 19:01:16
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