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wuhao4850103銀蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[交流]
熒光定量PCR擴(kuò)增后溶解曲線出現(xiàn)雜峰
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| 本人最近在做熒光定量PCR實(shí)驗(yàn),用的引物和以前的一樣,只是cDNA模板不同,但是最近實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增后的溶解曲線出現(xiàn)了或大或小的雜峰,以前用這些引物擴(kuò)增的時(shí)候溶解曲線里面基本上沒(méi)有雜峰。所以,我想會(huì)不會(huì)是由于每次做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候都要把稀釋后的引物從負(fù)20度拿出來(lái),然后融化一部分,結(jié)果引物反復(fù)凍融以后造成了這種現(xiàn)象,引物反復(fù)凍融會(huì)影響其擴(kuò)增的特異性嗎? |

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新蟲(chóng) (小有名氣)
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CT值多大?如果樣品濃度太少的話會(huì)出現(xiàn)菲特異性擴(kuò)增 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
新蟲(chóng) (小有名氣)
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會(huì)不會(huì)樣品降解了 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
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銀蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

銀蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

新蟲(chóng) (初入文壇)
銀蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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我之前也用過(guò)這一批的cDNA擴(kuò)增過(guò),不過(guò)用其他的引物,最后的熔解曲線還都比較正常。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |

新蟲(chóng) (初入文壇)
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ct值去到35,肯定就是這個(gè)模版的這個(gè)基因濃度太低了,模版濃度高一般不會(huì)出現(xiàn)這種問(wèn)題 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
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