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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 熒光定量PCR
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晏育偉
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[求助]
熒光定量PCR
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請大家?guī)兔纯次业膶嶒炇悄睦锍鰡栴}了。 本人現(xiàn)在在做一種寄生蟲的某個目的基因在感染宿主后不同時期的表達量差異。設(shè)計實驗如下，直接提取寄生蟲RNA和不同感染時期寄主中腸組織RNA（四個時期），反轉(zhuǎn)錄成cDNA；根據(jù)目的基因設(shè)計RT-PCR引物（經(jīng)驗證，該引物的特異性很好），以寄生蟲β-tubulin為內(nèi)參基因，做RT-PCR；實驗過程中直接提取寄生蟲RNA的樣品有很好的擴增曲線和溶解曲線，但是提取的中腸組織RNA樣品卻什么都沒有？我的實驗操作，試劑，引物和RT-PCR條件都沒有問題，初步懷疑中腸組織中沒有提取出該寄生蟲的RNA，用RT-PCR引物直接做普通PCR，能擴增出目的基因和內(nèi)參基因，且條帶非常亮，沒有非特異性帶。請問這是什么原因呢？ |
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