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熒光定量PCR 疑難雜癥 已有2人參與
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這幾天跑的熒光定量PCR結(jié)果很糟糕；請有經(jīng)驗的大俠指點一二： 基因拷貝數(shù)偏低，Ct值開始40左右，優(yōu)化后30-32，但是問題出現(xiàn)了，NTC也有擴增了，換了一管新的引物（干粉稀釋）結(jié)果還是一樣，根據(jù)溶解曲線判斷應(yīng)該是產(chǎn)物 在熒光定量前，用普通PCR鑒定過，條帶大小和測序結(jié)果都對；用熒光定量pcr的結(jié)果跑電泳，條帶位置跟以前一樣（包括NTC）；30左右拷貝數(shù)應(yīng)該也有10的3次方了，難道是產(chǎn)物污染？？？ 還有就是熒光信號很低，會是假陽性擴增么？？？？還是因為模板的拷貝數(shù)很低造成的？模板加量已經(jīng)很多，為什么實驗組跟NTC的Ct值幾乎一樣呢？？？？ |
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