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熒光定量PCR 疑難雜癥 已有2人參與
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這幾天跑的熒光定量PCR結(jié)果很糟糕；請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的大俠指點(diǎn)一二： 基因拷貝數(shù)偏低，Ct值開(kāi)始40左右，優(yōu)化后30-32，但是問(wèn)題出現(xiàn)了，NTC也有擴(kuò)增了，換了一管新的引物（干粉稀釋）結(jié)果還是一樣，根據(jù)溶解曲線判斷應(yīng)該是產(chǎn)物 在熒光定量前，用普通PCR鑒定過(guò)，條帶大小和測(cè)序結(jié)果都對(duì)；用熒光定量pcr的結(jié)果跑電泳，條帶位置跟以前一樣（包括NTC）；30左右拷貝數(shù)應(yīng)該也有10的3次方了，難道是產(chǎn)物污染？？？ 還有就是熒光信號(hào)很低，會(huì)是假陽(yáng)性擴(kuò)增么？？？？還是因?yàn)槟０宓目截悢?shù)很低造成的？模板加量已經(jīng)很多，為什么實(shí)驗(yàn)組跟NTC的Ct值幾乎一樣呢？？？？ |
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