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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » PCR相關 » 熒光定量PCR 疑難雜癥
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熒光定量PCR 疑難雜癥 已有2人參與
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這幾天跑的熒光定量PCR結果很糟糕；請有經驗的大俠指點一二： 基因拷貝數偏低，Ct值開始40左右，優(yōu)化后30-32，但是問題出現了，NTC也有擴增了，換了一管新的引物（干粉稀釋）結果還是一樣，根據溶解曲線判斷應該是產物 在熒光定量前，用普通PCR鑒定過，條帶大小和測序結果都對；用熒光定量pcr的結果跑電泳，條帶位置跟以前一樣（包括NTC）；30左右拷貝數應該也有10的3次方了，難道是產物污染？？？ 還有就是熒光信號很低，會是假陽性擴增么？？？？還是因為模板的拷貝數很低造成的？模板加量已經很多，為什么實驗組跟NTC的Ct值幾乎一樣呢？？？？ |
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