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18366882927新蟲 (初入文壇)
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[求助]
之前做過的PCR重復(fù)不出來，求大神幫忙看一下？？急！急！急！不然就得換導(dǎo)師了。 已有3人參與
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這是設(shè)計的大腸桿菌DH5α引物 F：5，CGCGGATCCATGGCTGTTACTAATGTCG 3， R：5，CCGCTCGAGTTAAGCGGATTTTTTCG 3， PCR體系（25ul): 模板 ： 2ul Taq酶 ： 0.125ul primer : 0.625ul ：0.625ul 10xbuffer : 2.5ul 2.5mMdNTP : 2ul dd水 ： 17.125ul 條件：1. 95℃ 4min 2. 95℃ 40s 61℃ 30s 72℃ 3min 3. 72℃ 10min 這是體系和條件，求大神幫忙，幫我找找原因，要崩潰了。。。。。  年前普通Taq酶P的條帶.png 年前高保真酶primer starP出的條帶.png 年后普通taq酶P的，沒有條帶.png 1.jpg 2.jpg |
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2017-03-28 07:43:53
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2017-03-28 07:43:53
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首先可以將模板跑個電泳看下模板是否被降解，其次稍微降低一下你的退火溫度，降至55度，并提高下循環(huán)數(shù)，如33個循環(huán)，看看是否有目的片段擴增出來，如果有，將片段切下來純化之后再當(dāng)模板做一次pcr 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2017-03-28 00:43:17
科學(xué)小覃
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3樓2017-03-27 17:28:06
張凡云
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7樓2017-03-28 10:14:15
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9樓2017-03-28 13:47:52
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模板是菌液，過夜搖和復(fù)搖的，應(yīng)該問題不大，昨天我同學(xué)幫我p的，p出來了，我現(xiàn)在懷疑是不是酶的問題。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2017-03-29 10:11:32
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