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[交流]
RT-PCR后的cDNA呢？ 已有5人參與
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今天做真菌RT-PCR合成cDNA第一鏈，但是卻出現(xiàn)下圖結(jié)果，我的目的RNA應(yīng)是1000多bp，請做過的蟲子幫忙分析下原因。marker是DL2000，最右面是RNA，中間兩道分別是用oligo（dT）和隨機(jī)引物作引物的結(jié)果。 [ Last edited by amisking on 2010-5-10 at 18:18 ] |
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tingl0087(金幣+2,VIP+0):謝謝！ 8-12 23:25
tingl0087(金幣+2,VIP+0):今天直接RT后做了PCR，可是只有引物二聚體，照你的經(jīng)驗，可能是什么原因呢？再謝謝了！ 8-12 23:32
tingl0087(金幣+2,VIP+0):謝謝！ 8-12 23:25
tingl0087(金幣+2,VIP+0):今天直接RT后做了PCR，可是只有引物二聚體，照你的經(jīng)驗，可能是什么原因呢？再謝謝了！ 8-12 23:32
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真菌這類真核生物，如果用Trizol提RNA，本來就應(yīng)該有3條帶吧，5.8S， 18 S， 28 S RNA，沒有錯。 cDNA基本上電泳看不出條帶的，就是smear，樓主不用電泳了，直接逆轉(zhuǎn)錄，沒有問題。cDNA的量本來就少，加上是單鏈，看不出自己目的條帶的。18S，28S RNA 能看到，是因為它的濃度非常大，有比較均一，一樣的大小。 |
9樓2009-08-12 11:19:19
10樓2009-08-12 14:51:01
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