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dongfangzz銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于RNA提取后DNaseⅠ的處理 已有8人參與
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三個問題： 1、要做Real-time PCR。總RNA提取后，RNA中DNaseⅠ的處理是常規(guī)的步驟還是可做可不做？ 2、用苯酚/氯仿抽提法去除DNaseⅠ時，有資料說 加入10μl 3M的醋酸鈉，250μl 冷乙醇，冰上放置10分鐘。該步的冷乙醇是無水乙醇還是70％的乙醇。后面的步驟用的是70％的乙醇（標(biāo)明的）。而該處沒標(biāo)明濃度，很迷惑！ 3、問題2中的 10μl 3M的醋酸鈉 ，其中的3M 是什么意思？是濃度嗎？但是濃度也不是這么表示的呀？ 謝謝 [ Last edited by dongfangzz on 2010-6-4 at 12:20 ] |
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+3):good 2010-06-04 21:35:13
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+3):good 2010-06-04 21:35:13
| 一般是需要處理RNA中的基因組DNA的，即使電泳看不到DNA的污染，09年的一篇文章給出了熒光定量PCR發(fā)SCI論文的要求：MIQE，Google學(xué)術(shù)搜一下第一篇即是，處理基因組DNA是為了避免基因組污染的一個環(huán)節(jié)，還有跨內(nèi)含子設(shè)計引物，試劑RTminus的對照；可是使用試劑盒提取RNA（在這個過程除去RNA中的DNA，如Qiagen和天跟的盒子）也可以用Fermentas的DNase I 在反轉(zhuǎn)錄之前處理基因組DNA，處理完用EDTA失活后接著往下做反轉(zhuǎn)錄就可以（我們實驗室以前都是這么做的），關(guān)于MIQE的這篇文章建議做熒光定量發(fā)SCI的看看！祝你好運！ |
5樓2010-06-04 21:23:54
dongfangzz
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9樓2010-06-09 23:11:06
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10樓2010-06-09 23:14:52
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