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dongfangzz銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于RNA提取后DNaseⅠ的處理 已有8人參與
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三個(gè)問題: 1、要做Real-time PCR?俁NA提取后,RNA中DNaseⅠ的處理是常規(guī)的步驟還是可做可不做? 2、用苯酚/氯仿抽提法去除DNaseⅠ時(shí),有資料說 加入10μl 3M的醋酸鈉,250μl 冷乙醇,冰上放置10分鐘。該步的冷乙醇是無水乙醇還是70%的乙醇。后面的步驟用的是70%的乙醇(標(biāo)明的)。而該處沒標(biāo)明濃度,很迷惑! 3、問題2中的 10μl 3M的醋酸鈉 ,其中的3M 是什么意思?是濃度嗎?但是濃度也不是這么表示的呀? 謝謝 [ Last edited by dongfangzz on 2010-6-4 at 12:20 ] |
金蟲 (小有名氣)
木蟲 (正式寫手)
鐵桿木蟲 (正式寫手)
木蟲 (小有名氣)
| 一般是需要處理RNA中的基因組DNA的,即使電泳看不到DNA的污染,09年的一篇文章給出了熒光定量PCR發(fā)SCI論文的要求:MIQE,Google學(xué)術(shù)搜一下第一篇即是,處理基因組DNA是為了避免基因組污染的一個(gè)環(huán)節(jié),還有跨內(nèi)含子設(shè)計(jì)引物,試劑RTminus的對(duì)照;可是使用試劑盒提取RNA(在這個(gè)過程除去RNA中的DNA,如Qiagen和天跟的盒子)也可以用Fermentas的DNase I 在反轉(zhuǎn)錄之前處理基因組DNA,處理完用EDTA失活后接著往下做反轉(zhuǎn)錄就可以(我們實(shí)驗(yàn)室以前都是這么做的),關(guān)于MIQE的這篇文章建議做熒光定量發(fā)SCI的看看!祝你好運(yùn)! |
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