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黎亞麗新蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】IPTG 已有11人參與
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| 在SDSPAGE凝膠電泳中，IPTG是誘導(dǎo)重組菌蛋白的表達，那IPTG在誘導(dǎo)過程中對菌生長有那些影響？ |
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2樓2010-07-26 19:12:14
holyala
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誘導(dǎo)原理： E.coli的乳糖操縱子（元）含Z、Y及A三個結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙�；D(zhuǎn)移酶，此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調(diào)節(jié) 基因I（圖15-4）。I基因編碼一種阻遏蛋白，后者與O序列結(jié)合，使操縱子（元）受阻遏而處于關(guān)閉狀態(tài)。在啟動序列P上游還有一個分解（代謝）物基因激 活蛋白（CAP）結(jié)合位點。由P序列、O序列和CAP結(jié)合位點共同構(gòu)成lac操縱子的調(diào)控區(qū)，三個酶的編碼基因即由同一調(diào)控區(qū)調(diào)節(jié)，實現(xiàn)基因產(chǎn)物的協(xié)調(diào)表 達 。在沒有乳糖存在時，lac操縱子（元）處于阻遏狀態(tài)。此時，I序列在PI啟動序列操縱下表達的Lac阻遏蛋白與O序列結(jié)合，阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié) 合，抑制轉(zhuǎn)錄起動。當(dāng)有乳糖存在時，lac操縱子（元）即可被誘導(dǎo)。在這個操縱子（元）體系中，真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖進入細胞，經(jīng)b－半乳糖苷 酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘�。后者作為一種誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白，使蛋白構(gòu)象變化，導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一 種作用極強的誘導(dǎo)劑，不被細菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實驗室廣泛應(yīng)用。 另外建議LZ回去多看看分子克隆實驗指南之類的書。 |
3樓2010-07-26 19:22:06
4樓2010-07-26 20:04:21
黎亞麗
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5樓2010-07-27 08:34:31
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6樓2010-07-27 08:35:45
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7樓2010-07-27 09:21:58
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8樓2010-07-27 09:52:02
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9樓2010-07-27 09:52:24
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10樓2010-07-27 16:07:00
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