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[交流]
【求助/交流】非特異性酶切
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各位蟲友，我現(xiàn)在在做以畢赤酵母為表達(dá)載體分泌表達(dá)Ek酶，表達(dá)出的Ek酶量比較少，所以需要進(jìn)行超濾濃縮，然后對標(biāo)簽蛋白進(jìn)行酶切。 但是酶切后的電泳結(jié)果顯示融合蛋白被切碎了，（切下的目的蛋白因分子量較小沒有檢測到，且目的蛋白沒有活性），我們選擇了23度和37度比較，結(jié)果也都是切碎了。 這種情況可能是什么原因造成的呢？有沒有可能是酵母發(fā)酵過程中的代謝產(chǎn)物？抑或酵母自身細(xì)胞破碎導(dǎo)致胞內(nèi)有活性的雜蛋白釋放出來？想了好久還是不知道問題出在哪里，實驗很長時間了都進(jìn)行不下去，很是著急，請各位蟲友幫忙解答！謝謝 |
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3樓2010-11-06 08:42:41
lxj341401
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2樓2010-11-05 22:45:49
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4樓2010-11-06 09:06:20
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