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zzzccc新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】菌液PCR問(wèn)題 已有4人參與
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各位大仙給個(gè)意見(jiàn)，我最近想篩CDNA文庫(kù)，挑了180個(gè)斑，前100多個(gè)搖了菌后PCR的結(jié)果都不錯(cuò)，可后幾十個(gè)怎么都擴(kuò)不出來(lái)。 補(bǔ)充的是，我都是200轉(zhuǎn)搖了6-7個(gè)小時(shí)，而且我搖出來(lái)的菌大多時(shí)間放在4°，共4、5天，并且我在準(zhǔn)備PCR的時(shí)候菌在室溫下放的時(shí)間也比較長(zhǎng)，每次擴(kuò)都放2、3個(gè)小時(shí)。這些是不是有影響，而且我有檢測(cè)了一下我最初擴(kuò)出的菌現(xiàn)在又?jǐn)U增不出來(lái)了。郁悶，我剛剛接觸分子方面的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)幫我找找原因，不勝感激�。� |
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zhangxn2010
木蟲(chóng) (著名寫手)
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3樓2010-12-04 09:40:58
★ ★ ★ ★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+3):good 2010-12-04 08:22:16
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+3):good 2010-12-04 08:22:16
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normally I follow this protocol E. coli Colony PCR 1. Pick colony with toothpick and swirl into 25 μl of TE (or dH2O) in microfuge tube. 2. Heat in boiling water bath for 2 minutes (can be used directly for PCR). 3. Spin for 2 minutes at top speed in microfuge. 4. Transfer 20 μl of supernatant to new microfuge tube. 5. Use 1-2 μl as template in 25 μl PCR reaction. in my hands it works well maybe your culture concentration is too high, which affects the PCR reaction |
2樓2010-12-04 00:34:11
zzzccc
新蟲(chóng) (初入文壇)
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5樓2010-12-04 16:26:28
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