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wqf@126.com銀蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】蛋白質(zhì)的陰離子交換純化 已有12人參與
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各位大俠： 我做的蛋白等電點(diǎn)是4.3，用PH=7.4的PBS緩沖液作為A液來平衡柱子，該緩沖液不含NaCl，結(jié)果出乎意料的是我的蛋白質(zhì)竟然不能結(jié)合到柱子上去，而直接從柱子里穿透出來，這是為什么呢？ |
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微笑漩渦
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你的蛋白對NaCl敏感么？ 離子強(qiáng)度不夠，蛋白掛不上去吧？ 
2樓2011-03-07 15:52:10
wqf@126.com
銀蟲 (正式寫手)
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3樓2011-03-07 16:13:53
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4樓2011-03-07 16:38:05
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加熱是否對目標(biāo)蛋白質(zhì)有影響，怎么上柱前不測定？最好每一步都有蛋白質(zhì)總量和目標(biāo)蛋白質(zhì)總量和活性的數(shù)據(jù)，不然出了問題也不知道在哪里出，或者出了問題還不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)。 陰離子交換層析需要低鹽吸附，高鹽洗脫，所以平衡液和蛋白質(zhì)樣品的離子濃度都不能高。你的目標(biāo)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)在4.3，平衡液的pH值為7.4，產(chǎn)生的電荷差距足夠吸附有余了，所以不能吸附的原因是蛋白質(zhì)早就失去活性，怎么測都測不到，或者平衡液和蛋白質(zhì)樣品離子濃度過高，樣品沒能被吸附就被洗脫。注意過電導(dǎo)率cond%嗎？ 無圖無真相，如果是用AKTA的，把圖截下來發(fā)上來。如果是用自動收集儀的，就盡量獲得離子強(qiáng)度的測定方法，弄個(gè)電導(dǎo)儀。 |
5樓2011-03-07 16:41:24
rhy1027
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首先糾正你一個(gè)說法，PBS中的S就是sodium的縮寫，也就是說你的buffer是PB（即磷酸緩沖液）不是PBS。 你蛋白的等電點(diǎn)是預(yù)測出來的吧，一般來說，預(yù)測出來的等電點(diǎn)跟實(shí)際值相差不會超過1，但你所描述的情況我也遇到過，換做是我的話，就會直接改變純化方案了，用陰離子柱反穿后，再做陽離子交換試試，當(dāng)然這中間一定要徹底脫鹽了！但你別指望非特異性吸附柱子會給你多純的東西，后面的步驟就要“因地制宜”了！根據(jù)你目的產(chǎn)物的特性，進(jìn)一步確立純化方案！多查查文獻(xiàn)吧！ |
6樓2011-03-07 16:50:17
7樓2011-03-07 16:51:26
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9樓2011-03-07 21:10:17
tianliudut
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10樓2011-03-07 21:21:17
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