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wqf@126.com銀蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】蛋白質(zhì)的陰離子交換純化 已有12人參與
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各位大俠： 我做的蛋白等電點是4.3，用PH=7.4的PBS緩沖液作為A液來平衡柱子，該緩沖液不含NaCl，結(jié)果出乎意料的是我的蛋白質(zhì)竟然不能結(jié)合到柱子上去，而直接從柱子里穿透出來，這是為什么呢？ |
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wqf@126.com
銀蟲 (正式寫手)
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3樓2011-03-07 16:13:53
微笑漩渦
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你的蛋白對NaCl敏感么？ 離子強度不夠，蛋白掛不上去吧？ 2樓2011-03-07 15:52:10
lcy1971
銀蟲 (小有名氣)
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4樓2011-03-07 16:38:05
冼亮淀粉酶
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
rainwander(金幣+2): 鼓勵積極參與交流~~~ 2011-03-07 19:53:43
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
rainwander(金幣+2): 鼓勵積極參與交流~~~ 2011-03-07 19:53:43
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加熱是否對目標(biāo)蛋白質(zhì)有影響，怎么上柱前不測定？最好每一步都有蛋白質(zhì)總量和目標(biāo)蛋白質(zhì)總量和活性的數(shù)據(jù)，不然出了問題也不知道在哪里出，或者出了問題還不能及時發(fā)現(xiàn)。 陰離子交換層析需要低鹽吸附，高鹽洗脫，所以平衡液和蛋白質(zhì)樣品的離子濃度都不能高。你的目標(biāo)蛋白質(zhì)等電點在4.3，平衡液的pH值為7.4，產(chǎn)生的電荷差距足夠吸附有余了，所以不能吸附的原因是蛋白質(zhì)早就失去活性，怎么測都測不到，或者平衡液和蛋白質(zhì)樣品離子濃度過高，樣品沒能被吸附就被洗脫。注意過電導(dǎo)率cond%嗎？ 無圖無真相，如果是用AKTA的，把圖截下來發(fā)上來。如果是用自動收集儀的，就盡量獲得離子強度的測定方法，弄個電導(dǎo)儀。 |
5樓2011-03-07 16:41:24
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