wangy0908

金蟲 (正式寫手)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 250.3
帖子: 350
在線: 92.9小時
蟲號: 1131990

[交流] 【求助/交流】質(zhì)粒DNA可以不通過酶切直接跑電泳檢測嗎？

我最近做克隆，提取質(zhì)粒DNA后，直接用以前擴增目的條帶的引物來擴增質(zhì)粒DNA，想看看是否是陽性的克隆，可是怎么也擴增不出來，所以第一個問題是請教各位：是否可以用這樣的引物來擴增？我個人感覺理論上是可以的！
其次是，我的質(zhì)粒DNA是不是有問題，也會導(dǎo)致這樣的情況，那么就想請教質(zhì)粒DNA是否不需要經(jīng)過酶切而直接跑電泳檢測呢？
以及如何來檢測陽性克隆是做好的方法？謝謝大家

我篩選單菌落是用的IPTG和X-GOL，也就是挑選白色的單菌落后培養(yǎng)提取質(zhì)粒DNA！

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費? 已經(jīng)有186人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:

求助：為什么PCR可以P出來，但是酶切條帶不對呢？已經(jīng)有6人回復(fù)
奇怪的質(zhì)粒酶切已經(jīng)有4人回復(fù)
DNA過夜后電泳跑不出來了已經(jīng)有6人回復(fù)
我跑的質(zhì)粒DNA瓊脂糖電泳的圖怎么是這樣的，什么原因啊已經(jīng)有15人回復(fù)
提取質(zhì)粒跑電泳后發(fā)現(xiàn)在溴酚藍上面有一團白色的類似條帶的東西，求解��！已經(jīng)有10人回復(fù)
pGEM-T質(zhì)粒酶切時遇到的一些問題已經(jīng)有11人回復(fù)
質(zhì)粒大小如何檢測已經(jīng)有21人回復(fù)
總DNA酶切電泳圖已經(jīng)有12人回復(fù)
克隆質(zhì)粒上的基因需要將質(zhì)粒酶切成線性嗎？已經(jīng)有15人回復(fù)
Sau 3AI 酶切DNA片段無帶怎么回事？已經(jīng)有7人回復(fù)
有誰知道關(guān)于Pfrt I 質(zhì)粒的信息，包括他的基因序列和含有的酶切位點。急啊已經(jīng)有4人回復(fù)
大質(zhì)粒的大小（bp）通常如何檢測已經(jīng)有5人回復(fù)
新手求助——質(zhì)粒電泳條帶問題已經(jīng)有15人回復(fù)
質(zhì)粒單酶切之后比原始質(zhì)粒變小了�。。�？？已經(jīng)有7人回復(fù)
求助：為什么線性化的質(zhì)�；厥罩箅娪窘Y(jié)果不是一條帶已經(jīng)有11人回復(fù)
我做酶切電泳自制marker開始都挺好，后來跑不開了。已經(jīng)有7人回復(fù)
我酶切質(zhì)粒后，電泳顯示沒有切開，是不是因為酶在外面放的時間長了？已經(jīng)有9人回復(fù)
質(zhì)粒是否需要酶切后再電泳？已經(jīng)有9人回復(fù)
【求助/交流】求助、質(zhì)粒酶切沒有條帶？已經(jīng)有18人回復(fù)
【求助/交流】PCR引物設(shè)計出來了，但酶切之后電泳沒條帶啊已經(jīng)有18人回復(fù)
【求助/交流】質(zhì)粒pPICZA酶切問題已經(jīng)有5人回復(fù)
【求助/交流】提質(zhì)粒后跑的電泳圖已經(jīng)有10人回復(fù)
【求助/交流】質(zhì)粒電泳中的三條帶已經(jīng)有14人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2011-04-06 10:12:33

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

lxj341401

至尊木蟲 (著名寫手)

★ ★ ★ ★
1949stone(金幣+4): 鼓勵 2011-04-06 14:06:25
wangy0908(金幣+10): 2011-04-06 20:58:11

引用回帖:

Originally posted by wangy0908 at 2011-04-06 10:12:33:
我最近做克隆，提取質(zhì)粒DNA后，直接用以前擴增目的條帶的引物來擴增質(zhì)粒DNA，想看看是否是陽性的克隆，可是怎么也擴增不出來，所以第一個問題是請教各位：是否可以用這樣的引物來擴增？我個人感覺理論上是可以的！ ...

直接用是可以的，只要引物3‘和模板匹配較好就可以了，建議PCR時質(zhì)粒模板先單酶切處理，這樣PCR容易。質(zhì)粒電泳如果看大小的話最好單酶切處理，不酶切的話電泳表現(xiàn)分子大小與實際大小有差別的。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

3樓2011-04-06 10:43:17

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

查看全部 25 個回答

whilecy

銀蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 215.8
帖子: 26
在線: 7.7小時
蟲號: 1222167

雖然不懂，但覺得你的研究很有前途，路過~

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2011-04-06 10:24:21

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

zhaohq1209

鐵桿木蟲 (著名寫手)

1949stone(EPI+1): 學(xué)習(xí)下 2011-04-06 14:07:00
wangy0908(金幣+20): 2011-04-06 20:59:17

引用回帖:

用你的引物來鑒定是沒有問題的，確實單酶切之后效果會好，但得保證你的酶切位點不在PCR引物中。

個人認(rèn)為你提取的質(zhì)粒跑電泳是沒有意義的。因為藍白斑篩選也會有假陽性產(chǎn)生，特別是用pMD-18T載體，比20T的效果好差一些，當(dāng)然價格上也便宜一些。lz的情況應(yīng)該是假陽性克隆，最好不要單獨根據(jù)顏色來篩選，可以采用菌落PCR先初步鑒定，然后搖菌提質(zhì)粒，得到質(zhì)粒后可以PCR，最好也單酶切后電泳來鑒定。不酶切直接跑電泳可能出現(xiàn)的情況比較復(fù)雜，不好判斷。

贊一下(2人)

回復(fù)此樓

4樓2011-04-06 12:20:36

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

wangy0908

金蟲 (正式寫手)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 250.3
帖子: 350
在線: 92.9小時
蟲號: 1131990

引用回帖:

Originally posted by zhaohq1209 at 2011-04-06 12:20:36:
用你的引物來鑒定是沒有問題的，確實單酶切之后效果會好，但得保證你的酶切位點不在PCR引物中。

個人認(rèn)為你提取的質(zhì)粒跑電泳是沒有意義的。因為藍白斑篩選也會有假陽性產(chǎn)生，特別是用pMD-18T載體，比20T的效 ...

我沒有進行酶切，就直接跑的PCR，怎么也擴增不出來。我用的是pGEM-T載體。
謝謝。還想問問，如果不酶切跑PCR，能跑出來的嗎？因為如果能跑出來的話，我就覺得我的質(zhì)粒DNA是肯定有問題了，就得重新再做鏈接以及轉(zhuǎn)化這些的。

贊一下

回復(fù)此樓

9樓2011-04-07 07:18:00

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自動化所實習(xí) +6	Losir 2026-03-12	7/350	2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +7	邱gl 2026-03-11	8/400	2026-03-17 09:36 by 努力學(xué)習(xí)賺彩禮
[考研] 302求調(diào)劑 +8	負(fù)心者當(dāng)誅 2026-03-11	8/400	2026-03-17 09:05 by 哦哦123
[考研] 286求調(diào)劑 +3	lemonzzn 2026-03-16	5/250	2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[文學(xué)芳草園] 伙伴們，祝我生日快樂吧 +17	myrtle 2026-03-10	26/1300	2026-03-16 18:32 by 青橙Ln
[考研] 材料與化工一志愿南昌大學(xué)327求調(diào)劑推薦 +7	Ncdx123456 2026-03-13	8/400	2026-03-16 12:15 by karry wen
[考研] 290求調(diào)劑 +5	孔志浩 2026-03-12	10/500	2026-03-16 09:01 by 余暉&
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +3	呼呼？~+123456 2026-03-14	3/150	2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 308 085701 四六級已過求調(diào)劑 +7	溫喬喬喬喬 2026-03-12	14/700	2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 341求調(diào)劑 +3	番茄頭--- 2026-03-10	3/150	2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 279求調(diào)劑 +3	Dizzy123@ 2026-03-10	3/150	2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] （081700）化學(xué)工程與技術(shù)-298分求調(diào)劑 +12	11啦啦啦 2026-03-11	35/1750	2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 301求調(diào)劑 +6	Liyouyumairs 2026-03-11	6/300	2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[考研] 274求調(diào)劑0856材料化工 +12	z2839474511 2026-03-11	13/650	2026-03-13 10:39 by peike
[考研] 求調(diào)劑資源與環(huán)境 285 +3	未名考生 2026-03-10	3/150	2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考研] 333求調(diào)劑 +3	152697 2026-03-12	4/200	2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3	崔wj 2026-03-12	4/200	2026-03-12 19:33 by 求調(diào)劑zz
[考研] 大連大學(xué)化學(xué)專業(yè)研究生調(diào)劑 +3	琪久. 2026-03-10	8/400	2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考博] 26申博求助 +3	跳躍餅干 2026-03-10	4/200	2026-03-10 21:15 by Tntcnn
[考研] 求調(diào)劑材料專碩293 +6	段_(:з」∠)_ 2026-03-10	6/300	2026-03-10 18:22 by ms629