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wuyuanqing金蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】引物合成 已有10人參與
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| 老板給我設(shè)計的引物，共有6條，最長的一條長度為114個堿基，我問過幾家公司（上海生工合成不了），都合成不了，請問有誰知哪幾家公司可以合成呀？謝謝。 |
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wuyuanqing
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14樓2011-04-13 09:00:19
wuyuanqing
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+5): good 2011-04-11 16:41:29
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+5): good 2011-04-11 16:41:29
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現(xiàn)在引物合成比較好的公司有華大、invitrogen，上海生工的質(zhì)量湊合，genewiz也有在做，不過114個堿基太長了，應(yīng)該沒有公司會給你合，一般情況下引物長度超過一定值（具體多少不清楚，大概60bp左右吧）每多合一個堿基要多收很多錢，因?yàn)樵诂F(xiàn)有技術(shù)條件下每增加一個堿基引入突變的幾率會成倍的增加，另外因?yàn)橐锏拈L度隨之帶來的引物完整性問題也很嚴(yán)重（越長越容易斷嗎，呵呵），所以正常情況下114個堿基是可以分成兩條引物來合的。 |
永峰1230
2樓2011-04-11 15:29:07
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5樓2011-04-11 15:48:48
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
西瓜(金幣+3, EPI+1): 長見識了！您的專題不開不行了！ 2011-04-11 17:50:25
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
西瓜(金幣+3, EPI+1): 長見識了！您的專題不開不行了！ 2011-04-11 17:50:25
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比如你的這條114bp的引物咱們分成A，B兩條來合成，假設(shè)是設(shè)計正向引物，A在B前面，那么在引物設(shè)計的時候你要使A引物的3’端與B引物的5'端有一段序列的重合（即overlap），一般15bp就可以了。這樣先拿B和反向引物擴(kuò)增得到第一輪產(chǎn)物，以此為模板再用A和反向引物擴(kuò)增就得到你要的片段了。酶切位點(diǎn)放在引物的5‘端，前面加4-5個堿基當(dāng)做保護(hù)堿基即可。有問題再交流，祝你好運(yùn) |
7樓2011-04-11 17:19:45
rainwander
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9樓2011-04-11 20:29:18
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10樓2011-04-11 21:23:10
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