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wuyuanqing金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】引物合成 已有10人參與
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| 老板給我設(shè)計(jì)的引物，共有6條，最長(zhǎng)的一條長(zhǎng)度為114個(gè)堿基，我問(wèn)過(guò)幾家公司（上海生工合成不了），都合成不了，請(qǐng)問(wèn)有誰(shuí)知哪幾家公司可以合成呀？謝謝。 |
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空谷幽風(fēng)
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西瓜(金幣+3, EPI+1): 長(zhǎng)見(jiàn)識(shí)了！您的專(zhuān)題不開(kāi)不行了！ 2011-04-11 17:50:25
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西瓜(金幣+3, EPI+1): 長(zhǎng)見(jiàn)識(shí)了！您的專(zhuān)題不開(kāi)不行了！ 2011-04-11 17:50:25
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比如你的這條114bp的引物咱們分成A，B兩條來(lái)合成，假設(shè)是設(shè)計(jì)正向引物，A在B前面，那么在引物設(shè)計(jì)的時(shí)候你要使A引物的3’端與B引物的5'端有一段序列的重合（即overlap），一般15bp就可以了。這樣先拿B和反向引物擴(kuò)增得到第一輪產(chǎn)物，以此為模板再用A和反向引物擴(kuò)增就得到你要的片段了。酶切位點(diǎn)放在引物的5‘端，前面加4-5個(gè)堿基當(dāng)做保護(hù)堿基即可。有問(wèn)題再交流，祝你好運(yùn) |
7樓2011-04-11 17:19:45
空谷幽風(fēng)
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dhd997(金幣+5): good 2011-04-11 16:41:29
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dhd997(金幣+5): good 2011-04-11 16:41:29
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現(xiàn)在引物合成比較好的公司有華大、invitrogen，上海生工的質(zhì)量湊合，genewiz也有在做，不過(guò)114個(gè)堿基太長(zhǎng)了，應(yīng)該沒(méi)有公司會(huì)給你合，一般情況下引物長(zhǎng)度超過(guò)一定值（具體多少不清楚，大概60bp左右吧）每多合一個(gè)堿基要多收很多錢(qián)，因?yàn)樵诂F(xiàn)有技術(shù)條件下每增加一個(gè)堿基引入突變的幾率會(huì)成倍的增加，另外因?yàn)橐锏拈L(zhǎng)度隨之帶來(lái)的引物完整性問(wèn)題也很?chē)?yán)重（越長(zhǎng)越容易斷嗎，呵呵），所以正常情況下114個(gè)堿基是可以分成兩條引物來(lái)合的。 |
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永峰12302樓2011-04-11 15:29:07
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3樓2011-04-11 15:36:38
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4樓2011-04-11 15:44:43
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