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chui2004鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】大腸桿菌轉(zhuǎn)化質(zhì)粒，出來的不是我要的了，怎么回事？ 已有8人參與
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最近在做質(zhì)粒構建的工作，當沒有完成最終構建之前，質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化大腸桿菌都很正常，而且很容易轉(zhuǎn)化成功，但是將質(zhì)粒構建成功后，轉(zhuǎn)化大腸桿菌變得非常困難，而且DH5a轉(zhuǎn)不進去;JM109，TOP10轉(zhuǎn)入后，跑電泳比我的目的質(zhì)粒小了，做雙酶切檢定，不是我要的質(zhì)粒載體，這是怎么回事呢？ 我做的是一個重組酶的載體，原始載體是pBV220，將構建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入BL21（DE3）感受態(tài)細胞中，在30°培養(yǎng)時，重組酶是否表達？原因是我在沒誘導之前，質(zhì)粒DNA已經(jīng)發(fā)生了部分的重組。 |
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3樓2011-04-12 22:26:23
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我將構建好的質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)入從某個公司買的E.clio DH5a感受態(tài)，這個感受態(tài)是個突變株，我這個質(zhì)粒能轉(zhuǎn)化進去（提的質(zhì)粒測序，序列正確），但是轉(zhuǎn)正常的DH5a就轉(zhuǎn)不進去。 當轉(zhuǎn)BL21時，質(zhì)粒能進去，在30°培養(yǎng)時，出來了比目的質(zhì)粒小的質(zhì)粒，我將提出來的質(zhì)粒做雙酶切，與我的目的質(zhì)粒的雙酶切電泳圖是一致的，因此，我是否可以判斷我的質(zhì)粒（原始質(zhì)粒是pBV220)在30°時，重組酶已經(jīng)表達了。 我現(xiàn)在很郁悶��！不知道該怎么往下做了。 |
4樓2011-04-13 08:23:50
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